La soluzione di conservazione del DNA libero è un reagente liquido specificamente utilizzato per conservare il DNA libero nel sangue e in altri campioni.e la sua integrità influisce direttamente sull'affidabilità dei risultati successivi dei test geneticiLa funzione della soluzione di conservazione del DNA gratuita è di proteggere le molecole di DNA dalla degradazione e dalla contaminazione durante il periodo dalla raccolta dei campioni al rilevamento.mantenere la loro concentrazione e struttura allo stato originale.
Logica di progettazione e componenti fondamentali della soluzione di conservazione
La soluzione di conservazione del DNA libero è un sistema di protezione multiottimizzato progettato per mantenere l'integrità strutturale del DNA libero alla sua concentrazione originale.le soluzioni di conservazione contengono in genere diversi componenti chiave.
La soluzione tampone è il componente di base della soluzione di conservazione, responsabile del mantenimento della stabilità del pH dell'intero sistema.Le molecole di DNA sono soggette a reazioni di deprotonazione o idrolisi in ambienti acidi o alcalini, e l'aggiunta di tampone può resistere efficacemente alle fluttuazioni del pH causate dal campione stesso o dall'ambiente esterno.e l' EDTA è la scelta più comune tra queste. Esistono nucleasi naturali nei campioni di sangue e l'attività di questi enzimi dipende spesso da ioni metallici quali gli ioni di magnesio come cofattori.privando le nucleasi delle condizioni ausiliarie necessarie per la loro attività, inibendo così il processo di degradazione del DNA.
Gli inibitori della proteasi hanno anche un posto nella soluzione di conservazione. Le proteasi nel campione possono degradare le proteine che si legano al DNA, influenzando indirettamente la stabilità delle molecole di DNA.L'aggiunta di inibitori della proteasi aiuta a mantenere lo stato di legame tra DNA e proteineIn alcune formulazioni, la protezione del DNA èvengono aggiunti anche inibitori della polimerasi per prevenire il consumo o l'alterazione dei modelli di DNA da reazioni di amplificazione non specifiche degli acidi nucleici che possono esistere nel campione.
La funzione principale della soluzione di conservazione
La soluzione di conservazione del DNA libero protegge il DNA libero attraverso più meccanismi.le nucleasi originariamente separate dalle cellule del sangue verranno rilasciate attraverso il metabolismo cellulare o entreranno in contatto con il DNA liberoSe non vengono inibite, le nucleasi continueranno a dividere le molecole di DNA, con conseguente diminuzione o persino scomparsa della concentrazione del frammento bersaglio.Gli agenti chelanti e gli inibitori della proteasi nella soluzione di conservazione riducono congiuntamente l' attività delle nucleasi, fornendo un ambiente chimico relativamente sicuro per il DNA.
La comodità offerta dalla conservazione a temperatura ambiente
Tradizionalmente, la conservazione del DNA libero si basa sul congelamento a bassa temperatura,e i campioni devono essere collocati in un ambiente a meno 20 gradi Celsius o addirittura a meno 80 gradi Celsius il prima possibile dopo la raccolta.Anche se questo metodo è efficace, richiede un grande investimento in attrezzature per la catena del freddo, condizioni di trasporto rigorose e procedure operative complesse.La soluzione di conservazione del DNA libera consente di conservare i campioni a temperatura ambiente per diverse settimane o anche più senza degradazione significativaQuesta caratteristica semplifica notevolmente il processo di raccolta, trasporto e stoccaggio temporaneo dei campioni.particolarmente adatto a scenari di applicazione in studi clinici multicentrici e istituti di assistenza sanitaria primaria.
Precauzioni durante l' uso
La soluzione libera di stoccaggio del DNA deve essere conservata in un luogo buio e fresco, evitando alte temperature e luce solare diretta.poiché il congelamento può causare la precipitazione o la denaturazione di alcuni componenti della soluzione di stoccaggioLa soluzione di conservazione è destinata ad essere utilizzata una sola volta e, una volta mescolata con il campione,non deve essere riutilizzato anche se non è completamente utilizzato per evitare la contaminazione incrociata. Prima di utilizzare, leggere attentamente il manuale del prodotto e operare secondo il rapporto di aggiunta raccomandato e il metodo di miscelazione.possono essere condotti esperimenti preliminari per verificare la compatibilità della soluzione di conservazione con il sistema di rilevamento successivo.
La soluzione di conservazione del DNA gratuita fornisce uno strumento efficiente per la gestione dei campioni in biopsia liquida.è adatto per la conservazione e il trasporto di DNA libero nei campioni di sangue, e può fornire una base di campionamento stabile per ulteriori test genetici.
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