Nei test biochimici clinici, il rilevamento dell'attività dell'alfa amilasi è un elemento di routine per lo screening e la diagnosi delle malattie del pancreas. EPS-G7, come substrato raccomandato dalla Federazione Internazionale di Chimica Clinica e Medicina di Laboratorio, fornisce un sistema di reazione standardizzato e quantificabile per il rilevamento dell'amilasi. Il suo design strutturale intelligente e il chiaro meccanismo di reazione sono diventati la base di schemi di rilevamento ampiamente utilizzati nei laboratori clinici.
Struttura chimica e proprietà dei substrati
Il nome chimico completo di EPS-G7 è 4,6-etilene-p-nitrofenil - α - D-maltoside. Dal punto di vista della struttura molecolare, è composto da una catena di maltosio costituita da sette unità di glucosio collegate ad un gruppo terminale p-nitrobenzene, con una modificazione 4,6-etilene introdotta all'estremità non riducente. Questa caratteristica strutturale lo rende un substrato di alta qualità per l'alfa amilasi. L'aspetto è una polvere da bianca a giallo chiaro con eccellente solubilità in acqua, che ne facilita la rapida preparazione in una soluzione di substrato omogenea in una soluzione tampone. Il prodotto ha una purezza superiore al 95% e deve essere conservato in un ambiente buio, asciutto e sigillatotemperatura a meno 20 gradi Celsius per evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti. La durata di conservazione è di 24 mesi.
Il principio di rilevamento in due fasi raccomandato da IFCC
Il metodo di rilevamento dell'EPS-G7 come substrato segue il metodo in due fasi accoppiato con enzimi raccomandato dall'IFCC, con un chiaro percorso di reazione. Il primo passo è la reazione di idrolisi enzimatica. L'alfa amilasi nel campione riconosce specificamente le molecole di substrato EPS-G7, scinde i loro legami glicosidici e genera prodotti intermedi di p-nitrofenil maltooligosaccaridi. Il sito di azione dell'α-amilasi è concentrato sul legame α-1,4-glicosidico all'interno della catena dello zucchero e, dopo la scissione, rilascia frammenti di p-nitrofenil oligosaccaride di diverse lunghezze di catena.
Il secondo passo è indicare la reazione legata all'enzima. I prodotti intermedi come gli oligosaccaridi di nitrobenzene maltosio non possono produrre direttamente segnali di colore rilevabili e l'alfa glucosidasi deve essere aggiunta come enzima ausiliario per idrolizzare ulteriormente questi prodotti intermedi e rilasciare quantitativamente p-nitrofenolo libero giallo. La funzione dell'α-glucosidasi è quella di scindere sequenzialmente le unità di glucosio dall'estremità non riducente della catena oligosaccaridica, liberando completamente i gruppi p-nitrofenile.
In questa reazione enzimatica in una o due fasi, la modificazione del 4,6-etilene sulla molecola del substrato gioca un ruolo cruciale. Blocca l'estremità non riducente, prevenendo efficacemente l'idrolisi diretta del substrato EPS-G7 intatto da parte dell'alfa glucosidasi, garantendo che l'enzima indicatore possa funzionare solo dopo che l'alfa amilasi ha prima scisso la catena dello zucchero. Questo meccanismo garantisce che i risultati del rilevamento possano riflettere realmente l'attività dell'alfa amilasi nel campione, piuttosto che l'attività degli enzimi ausiliari.
Rilevazione e quantificazione dell'assorbimento
Il p-nitrofenolo rilasciato dalla reazione appare giallo in condizioni alcaline e presenta un caratteristico picco di assorbimento alla lunghezza d'onda di 405 nanometri. Monitorando continuamente la velocità di aumento dell'assorbanza durante il processo di reazione, è possibile monitorare la produzione di p-nitrofenolo in tempo reale. In condizioni di reazione fisse, la velocità di variazione dell'assorbanza è direttamente proporzionale alla concentrazione dell'attività dell'alfa amilasi nel campione e l'attività enzimatica del campione da testare può essere calcolata confrontandola con la curva standard.
Garanzia di affidabilità dei risultati dei test
La forte specificità di reazione del substrato EPS-G7 è dovuta alla precisa corrispondenza della struttura molecolare del substrato con il centro attivo dell'enzima. Le raccomandazioni dell'IFCC garantiscono ulteriormente l'uniformità dei metodi di analisi e la comparabilità dei risultati tra diversi laboratori. Per gli scenari clinici che richiedono una valutazione accurata della funzione pancreatica e la differenziazione dall'addome acuto, i risultati di rilevamento forniti dal substrato EPS-G7 hanno un chiaro valore di riferimento. Il substrato EPS-G7 prodotto da Xindesheng ha un'elevata purezza e una buona stabilità del lotto, in grado di soddisfare i severi requisiti di qualità dei reagenti nei test clinici.
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