タンパク質浄化には通常,バッファーシステムに対する特定の要件を伴う一連の複数のステップが含まれます.CAPS バッファクロマトグラフィ,超濾過,透析における潜在的な応用は,アルカリ範囲におけるバッファング能力と金属複合化への低傾向による.浄化プロセスにおけるその役割を理解することで,より一貫したプロセス計画を設計し,バッファ切り替えによるサンプル損失を減らすことができます.
クロマトグラフィー段階におけるバッファ選択
イオン交換染色体は,しばしばアルカリ pH で動作し,標的タンパク質を負荷に負荷し,アニオン交換媒質に結合します.CAPS はこの範囲で安定した pH を提供できます.そしてその硫酸群は負の電荷を持ち,結合部位についてアニオン交換媒体を競合しない.. Tris と比べると,CAPS は核好性が低く,介質内のリガンドとの副作用が少なくなります.ターゲットタンパク質のCAPSバッファの安定性を確認し,バッファ構成要素による集積や降水を避ける必要がある..
塩とpHの相乗効果
水害性染色体は,高塩分条件でタンパク質の結合を促進します.CAPS自体には一定の離子強度があり,塩の降水のための補助成分として使用できます.しかし,CAPSのサイクロヘキシルグループは水害性があり,タンパク質表面の水害性の領域の振る舞いを変化させ,結合強度に影響を与える可能性があることに注意すべきである.方法の開発において対象タンパク質の保持時間と回復率の変化を観察するために,CAPS濃度をスクリーニング変数として使用することが推奨されます.
アフィニティ染色体学における互換性に関する考慮事項
アフィニティ染色体はバッファ成分に敏感である.特にリガンドが金属イオンである場合やケラート構造を含む場合.低金属ケラ化能力のCAPSは,ニッケルやコバルトの柱の負荷能力を低下させる可能性があります.抗体親和性染色体検査では,CAPSは通常Aタンパク質やGタンパク質の抗体結合に影響しません.しかし,エルーションステップでは,低pHが必要である場合CAPS は不適切で,酸性バッファに切り替わなければなりません.
超濾過と透析における PH 安定性
濃度と液体交換過程では,サンプルが膜材料と長時間接触する.超濾過膜上のCAPSバッファの吸着率は低い.流体分解は比較的遅い透析液交換中に,CAPSの分子量は比較的小さいので,透析膜を自由に通過できます.ダイアリゼートには,pHバランスを保つためにCAPSも含まれなければならないことに注意してください.,そうでなければ,バッファの稀释によりサンプルpHが漂流します.
浄化過程中の温度管理
浄化作業はしばしば冷や低温で行われ,CAPSのpHは温度によって変化する.バッファー溶液を室温に調節し,冷たい部屋に移動して使用する場合温度を調整し,冷室温で測定するか,室温で調整した後,実験前のデータに基づいて補償することを推奨します.クロマトグラフィー・コラムが冷室で動作するとき, バッファーの温度は柱温度と一致し,グラデントエルーション中にpH変動を軽減することができます.
他のバッファエージェントとの接続
多段階浄化では,異なるバッファエージェントの間で切り替えることがしばしば必要である.CAPSは,Trisやリン酸塩などの一般的に使用されるバッファエージェントと良好な互換性を持っています.しかし,混合するときにイオン強度とpHの重複効果に注意を払う必要があります.例えば,Tris バッファからCAPS バッファに切り替える場合,両者のpHが異なる場合は,まずトランジション バッファを使用してバランスする必要があります.直接切換とタンパク質降水による突然のpH変化を避けるため.
概要
CAPSは,染色体検査,超濾過,透析などの段階におけるタンパク質浄化プロセスにおけるアルカリ性バッファとして使用できる.低核好性と弱い金属複合性特性は,ほとんどのシナリオで軽度の行動を示す.温度管理,バッファ接続設計,増幅検証によって,CAPS は 浄化 プロセス で 信頼できる バッファー 選択 に なり ます.
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