Gedetailleerde methode voor het bereiden van HEPES-bufferoplossing

HEPES is een veelgebruikte zwitterionische buffer voor celcultuur die een stabiele zuurbasisomgeving kan handhaven binnen het fysiologische pH-bereik.HEPES-bufferMoederliker is een routineoperatie in het laboratorium, maar er zijn details waar je in elke stap op moet letten.De kwaliteit van de moederliquor en de betrouwbaarheid van latere celproeven zijn rechtstreeks gerelateerd aan de operationele normen., van wegen en oplossen tot pH-aanpassing, van constant volume tot filtratie en sterilisatie.

1Gewichten en oplossen

Om 1 liter 1M HEPES-moederliquor te bereiden, moeten 238,3 gram HEPES-poeder worden gewogen.Het wordt aanbevolen bij het wegen een weegschaal met voldoende nauwkeurigheid te gebruiken om te voorkomen dat weegfouten die kunnen leiden tot een afwijking van de eindconcentratie van de streefwaarde..

Het gewogen HEPES-poeder wordt toegevoegd aan ongeveer 800 ml gedestilleerd water.HEPES heeft een slechte oplosbaarheid onder zure omstandigheden en kan niet snel oplossen wanneer het voor het eerst in water wordt toegevoegd.Plaats de container op een magnetische roermachine en roer voortdurend totdat de oplossing volledig helder en transparant wordt, zonder dat onopgeloste deeltjes met het blote oog zichtbaar zijn.Dit proces duurt enige tijd en moet niet worden overhaastAls de oplosbaarheid traag is, kan de roertijd naar behoren worden verlengd, maar verwarming is niet nodig omdat HEPES bij normale kamertemperatuur volledig kan worden opgelost.

2. pH-aanpassing

HEPES-poeder zelf is zwak zuur en de pH van de oplossing na oplosing is veel lager dan het streefbereik.1M natriumhydroxide-oplossing wordt langzaam toegevoegd aan de roerende HEPES-oplossing.

De pH-aanpassing is de meest geduldige stap in dit bereidingsproces.en wacht tot de pH-meter is gestabiliseerd voordat u meetBij het benaderen van de doel pH is het nog meer noodzakelijk om druppelings toe te voegen om overtolligheid te voorkomen.4Het wordt aanbevolen de uiteindelijke pH op ongeveer 7 te controleren.35, aangezien er tijdens de daaropvolgende filtratie- en opslagprocessen een lichte pH-verschuiving kan optreden.

De pH-waarde van de HEPES-buffer verandert met de temperatuur, en als de oplossingstemperatuur aanzienlijk hoger of lager is dan de kamertemperatuur, wordt de pH-waarde van de HEPES-buffer bepaald door de temperatuur.de gemeten waarde kan afwijken van de werkelijke pH bij de streeftemperatuurDaarom moet de oplossing vóór de aanpassing van de pH worden afgekoeld of verwarmd tot kamertemperatuur.

3. Constante volume en filtratie

Na aanpassing van de pH wordt de oplossing overgebracht naar een volumetrische kolf van 1 liter en met gedistilleerd water tot aan het punt verdund.Indien het vorige proces van oplossen en pH-aanpassing in een beker is uitgevoerd, moet de binnenkant van de beker meerdere malen worden gespoeld met een kleine hoeveelheid gedistilleerd water om ervoor te zorgen dat alle HEPES-componenten in de volumetrische kolf worden overgebracht.Na het instellen van het volume, kan de pH-waarde opnieuw worden bevestigd en indien nodig kleine aanpassingen worden aangebracht.

De HEPES-moederliquor die wordt gebruikt voor celcultuur moet worden gesteriliseerd.de bereide moederliquor wordt in een steriele container verzameld via een steriele filter in een bioveiligheidskastHet filtratieproces moet een passende druk of negatieve druk handhaven om beschadiging van het membraan te voorkomen.

4Gebruik en opslag

In celcultuur bedraagt de werkconcentratie gewoonlijk 10 tot 25 millimole per liter.met de meest gebruikte 10 millimole per literDit betekent dat bij toevoeging van 1 milliliter moederliquor aan elke 100 milliliter kweekmiddel de werkconcentratie kan worden bereikt.Het wordt aanbevolen om de moedervloeistof te verdelen in kleine porties voor opslag om herhaalde bevriezing en ontdooiing en verontreiniging door opening te voorkomen.De opslagomstandigheden worden in het algemeen bij 2 tot 8 graden Celsius gekoeld en er dient aandacht te worden besteed aan de etikettering van de bereidingsdatum en de pH-waarde.

Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. is diep betrokken geweest op het gebied vanbiologische bufferactiesDe Commissie heeft zich al vele jaren ingezet voor het leveren van hoogzuivere en betrouwbare hoogwaardige grondstoffen voor de in vitro-diagnostiekindustrie.De door het bedrijf geproduceerde producten van de HEPES-bufferserie gebruiken precieze synthese- en zuiveringsprocessen, waarbij elke stap van de grondstoffen tot aan de eindproducten strikt wordt gecontroleerd, zodat de producten een uiterst hoge chemische zuiverheid en een uitstekende oplossingtransparantie hebben,en uitstekende consistentie van de partijAls u recente aankoopbehoeften heeft, klikt u op de officiële website voor meer informatie!