Λεπτομερής μέθοδος παρασκευής ρυθμιστικού διαλύματος HEPES

Το HEPES είναι ένα ευρέως χρησιμοποιούμενο zwitterionic buffer για την κυτταρική καλλιέργεια, το οποίο μπορεί να διατηρήσει ένα σταθερό περιβάλλον οξέος-βάσης εντός του εύρους φυσιολογικού pH.Ταμείο ασφαλείας HEPESΤο μητρικό αλκοόλ είναι μια ρουτίνα στο εργαστήριο, αλλά υπάρχουν λεπτομέρειες που πρέπει να δώσουμε προσοχή σε κάθε βήμα.Η ποιότητα του μητρικού υγρού και η αξιοπιστία των μετέπειτα κυτταρικών πειραμάτων σχετίζονται άμεσα με τα λειτουργικά πρότυπα., από τη ζύγιση και τη διάλυση μέχρι τη ρύθμιση του pH, από τον σταθερό όγκο μέχρι τη διήθηση και την αποστείρωση.

1Ζύγισμα και διάλυση

Για την παρασκευή 1 λίτρου 1M HEPES μητρικού αλκοόλ, πρέπει να ζυγίζονται 238,3 γραμμάρια HEPES σκόνης.Συνιστάται να χρησιμοποιείται ζυγαριά με επαρκή ακρίβεια κατά την ζύγιση, ώστε να αποφεύγονται σφάλματα ζύγισης που μπορεί να προκαλέσουν απόκλιση της τελικής συγκέντρωσης από την τιμή-στόχο..

Προστίθεται η ζυγισμένη σκόνη HEPES σε περίπου 800 ml αποσταγμένου νερού.Πρέπει να σημειωθεί ότι το HEPES έχει κακή διαλυτότητα σε όξιες συνθήκες και μπορεί να μην διαλύεται γρήγορα όταν προστίθεται για πρώτη φορά στο νερό.Τοποθετήστε το δοχείο σε μαγνητικό ανακατευτήρα και ανακατέψτε συνεχώς μέχρι το διάλυμα να γίνει εντελώς διαφανές και διαφανές, χωρίς να είναι ορατά με γυμνό μάτι αδιάλυτα σωματίδια.Η διαδικασία αυτή απαιτεί χρόνο και δεν πρέπει να βιαστείΕάν η διάλυση είναι αργή, ο χρόνος ανάμιξης μπορεί να παραταθεί κατάλληλα, αλλά δεν απαιτείται θέρμανση, επειδή το HEPES μπορεί να διαλυθεί πλήρως σε κανονική θερμοκρασία δωματίου.

2. ρύθμιση PH

Η ίδια η σκόνη HEPES είναι αδύναμα όξινη και το pH του διαλύματος μετά τη διάλυση είναι πολύ χαμηλότερο από το εύρος στόχου.Το 1M διάλυμα υδροξειδίου του νατρίου προστίθεται αργά στο διάλυμα HEPES.

Η προσαρμογή του pH είναι το πιο υπομονετικό βήμα στη διαδικασία παρασκευής.και περιμένετε την ανίχνευση του μετρητή pH να σταθεροποιηθεί πριν από τη μέτρησηΓια τους σκοπούς της κυτταρικής καλλιέργειας, το στόχο pH ορίζεται συνήθως μεταξύ 7,3 και 7.4Συνιστάται να ελέγχεται το τελικό pH σε περίπου 7.35, δεδομένου ότι μπορεί να υπάρξει μικρή απόκλιση του pH κατά τις επακόλουθες διαδικασίες διήθησης και αποθήκευσης.

Η θερμοκρασία επηρεάζει τη μέτρηση του pH. Η τιμή pH του θραύστη HEPES μεταβάλλεται με την θερμοκρασία και εάν η θερμοκρασία του διαλύματος είναι σημαντικά υψηλότερη ή χαμηλότερη από τη θερμοκρασία δωματίου,η μετρούμενη ένδειξη μπορεί να αποκλίνει από το πραγματικό pH στη θετική θερμοκρασία λειτουργίαςΩς εκ τούτου, πριν από τη ρύθμιση του pH, το διάλυμα πρέπει να ψύχεται ή να θερμαίνεται σε θερμοκρασία δωματίου.

3. Σταθερός όγκος και διήθηση

Μετά τη ρύθμιση του pH, το διάλυμα μεταφέρεται σε μια φιάλη μεγέθους 1 λίτρου και αραιώνεται μέχρι το σημείο με αποσταγμένο νερό.Εάν η προηγούμενη διαδικασία διάλυσης και ρύθμισης του pH διεξήχθη σε ποτήρι, είναι απαραίτητο να ξεπλένεται το εσωτερικό τοίχωμα του ποτηριού με μικρή ποσότητα αποσταγμένου νερού αρκετές φορές για να διασφαλιστεί ότι όλα τα συστατικά του HEPES μεταφέρονται στην ογκομετρική φιάλη.Μετά τη ρύθμιση της έντασης, η τιμή pH μπορεί να επιβεβαιωθεί και πάλι και να γίνουν μικρές προσαρμογές, εάν είναι απαραίτητο.

Το μητρικό υγρό HEPES που χρησιμοποιείται για την καλλιέργεια κυττάρων πρέπει να υποβληθεί σε επεξεργασία αποστείρωσης.το παρασκευασμένο μητρικό υγρό συλλέγεται σε αποστειρωμένο δοχείο μέσω αποστειρωμένου φίλτρου σε θάλαμο βιοασφάλειαςΗ διαδικασία διήθησης πρέπει να διατηρεί κατάλληλη πίεση ή αρνητική πίεση για να αποφεύγεται η βλάβη της μεμβράνης.

4Χρήση και Αποθήκευση

Το παρασκευασμένο μητρικό υγρό 1M HEPES ανήκει σε διάλυμα εφεδρείας υψηλής συγκέντρωσης.με το πιο συνηθισμένο να είναι 10 χιλιοστόλιτρα ανά λίτροΑυτό σημαίνει ότι προσθέτοντας 1 ml μητρικού αλκοόλ σε κάθε 100 ml πολιτιστικού μέσου μπορεί να επιτευχθεί η συγκέντρωση εργασίας.Συνιστάται η διαίρεση του μητρικού υγρού σε μικρές μερίδες για αποθήκευση, ώστε να αποφεύγεται η επαναλαμβανόμενη κατάψυξη και απόψυξη και η μόλυνση που προκαλείται από το άνοιγμα.Οι συνθήκες αποθήκευσης είναι γενικά ψυκτικές στους 2 έως 8 βαθμούς Κελσίου και πρέπει να δίνεται προσοχή στην επισήμανση της ημερομηνίας προετοιμασίας και της τιμής pH.

Η Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. έχει εμπλακεί βαθιά στον τομέα τηςβιολογικά αποθηκευτικά παράγοντεςκαι διαγνωστικών αντιδραστηρίων για πολλά χρόνια, και έχει πάντα δεσμευτεί να παρέχει υψηλής καθαρότητας και αξιόπιστη υψηλής ποιότητας πρώτες ύλες για τη βιομηχανία διαγνωστικών in vitro.Τα προϊόντα της σειράς HEPES που παράγονται από την εταιρεία υιοθετούν ακριβείς διαδικασίες σύνθεσης και καθαρισμού, ελέγχοντας αυστηρά κάθε βήμα από τις πρώτες ύλες μέχρι τα τελικά προϊόντα, εξασφαλίζοντας ότι τα προϊόντα έχουν εξαιρετικά υψηλή χημική καθαρότητα, εξαιρετική διαφάνεια του διαλύματος,και εξαιρετική συνέπεια παρτίδαςΕάν έχετε πρόσφατες ανάγκες αγοράς, κάντε κλικ στον επίσημο ιστότοπο για περισσότερες λεπτομέρειες!