Anwendung und Optimierung von HEPES in Proteinreinigungs- und Chromatographieprozessen

Produktname

4-Hydroxyethylpiperazinethansulfonsäure

Chemische238.305HEPES-Puffer

CAS-Nummer

7365-45-9Produkt-AussehenWeißes

kristallines

Molekulargewicht238.305Summenformel

C8H18N2O4SIn praktischen Reinigungsschemata wird empfohlen, bei der Verwendung von HEPES auf folgende Punkte zu achten: Bestätigen Sie im Voraus die Aktivitäts-Halbwertszeit des Zielproteins in HEPES, um die Proteinstabilität während des gesamten Reinigungsprozesses zu gewährleisten; Die Unterschiede im pH-Wert und in der Ionenstärke zwischen dem Gleichgewichtspuffer und dem Elutionspuffer sollten nicht zu groß sein, um eine Proteinfällung zu vermeiden; Zeichnen Sie die Leitfähigkeit oder den pH-Wert der Pufferlösung nach jeder Reinigung auf, um Vergleiche zwischen den Chargen zu ermöglichen. Durch systematische Aufzeichnungen und rechtzeitige Anpassungen kann HEPES als zuverlässige und einfach zu bedienende Pufferwahl in der Protein-Chromatographie dienen und die meisten konventionellen Reinigungsanforderungen erfüllen.1,07 g/mL bei 20 °C234-238 °C

HerstellerReinheitMehr als 99%

Standardverpackung

HerstellerHubei XindeshengSchutzwirkung auf die natürliche Konformation von Proteinen

Die Ionenstärke und der osmotische Druck von HEPES liegen relativ nahe an physiologischen Bedingungen, was während des Reinigungsprozesses eine relativ milde Mikroumgebung für Proteine bieten kann. Im Vergleich zu Phosphatpuffern bildet HEPES weniger leicht unlösliche Niederschläge mit Metallkofaktoren. Daher kann HEPES bei der Reinigung von Metallproteinen oder Enzymen, die Metallionen enthalten, die Löslichkeit von Kofaktoren aufrechterhalten und Veränderungen der Proteinkonformation aufgrund von Metallmangel vermeiden. Gleichzeitig hat HEPES im üblicherweise verwendeten pH-Bereich einen relativ geringen Einfluss auf die Oberflächenladung von Proteinen, wodurch das Risiko unspezifischer Aggregation verringert wird, was es besonders für empfindliche Proteine geeignet macht, die empfindlich auf pH-Schwankungen reagieren.

HEPES-PulverKompatibilitätsüberlegungen bei der Ionenaustauschchromatographie

Die Ionenaustauschchromatographie beruht auf der Ladungswechselwirkung zwischen Proteinen und dem Medium, und die Art und Konzentration der Ionen im Puffer beeinflussen direkt die Trenneffizienz. HEPES selbst ist eine zwitterionische Spezies mit einer Nettoladung von negativ um pH 7,0. Wenn ein Kationenaustauschmedium verwendet wird, kann HEPES mit den negativ geladenen Gruppen auf dem Medium konkurrieren und die Retentionszeit des Zielproteins leicht verändern. In der Praxis kann dieser Effekt durch Anpassung der Ionenstärke oder der Gleichgewichtszeit des Startpuffers gemildert werden. Bei der Anionenaustauschchromatographie ist die Beeinflussung durch HEPES relativ gering, aber es sollte dennoch auf seinen Konzentrationsbeitrag zum Gradienten des Waschens und Entsalzens geachtet werden, um eine Verzerrung der Gradientenberechnung zu vermeiden.

Chromatographieoperationen werden normalerweise bei niedrigen Temperaturen (z. B. 4 °C) oder bei Raumtemperatur durchgeführt. Der pKa-Wert von HEPES ändert sich mit der Temperatur nur geringfügig, so dass er in einer temperaturfluktuierenden Umgebung einen relativ stabilen pH-Wert aufrechterhalten kann, was für langfristige Chromatographieprozesse vorteilhaft ist. Wenn jedoch die Pufferlösung bei Raumtemperatur auf den Ziel-pH-Wert eingestellt und dann auf niedrige Temperaturen gebracht wird, kann es immer noch zu geringfügigen Abweichungen kommen. Es wird empfohlen, die Kalibrierung bei der Betriebstemperatur erneut zu überprüfen. Darüber hinaus kann es bei HEPES-Lösungen während der Langzeitlagerung oder des Recyclings zu mikrobiellem Wachstum kommen, was den pH-Wert und die Leitfähigkeit verändern kann. Daher wird empfohlen, sie vor jeder Reinigung frisch zuzubereiten oder zu filtern.Wenn bei bestimmten Reinigungsschritten von HEPES Störungen auftreten, kann der Wechsel zu anderen Good's-Puffern in Betracht gezogen werden. Zum Beispiel haben MES oder PIPES bei der Metallionen-Affinitätschromatographie eine schwächere Chelatbildungsfähigkeit und bieten oft eine höhere Bindungseffizienz. MOPS oder EPPS können für Detektionen in Betracht gezogen werden, die einen niedrigeren UV-Hintergrund erfordern. Beim Austausch ist es notwendig, die Stabilität und Aktivität des Zielproteins im neuen Puffersystem zu überprüfen und die Gleichgewichts- und Elutionsbedingungen anzupassen. Es ist erwähnenswert, dass nicht alle Labore jederzeit über mehrere Puffermittel verfügen können, so dass während der Methodenentwicklung mehr Vergleiche angestellt werden können, um die am besten geeignete Option in diesem System zu finden.

HEPE-Verpackung

Praktische BetriebsvorschlägeIn praktischen Reinigungsschemata wird empfohlen, bei der Verwendung von HEPES auf folgende Punkte zu achten: Bestätigen Sie im Voraus die Aktivitäts-Halbwertszeit des Zielproteins in HEPES, um die Proteinstabilität während des gesamten Reinigungsprozesses zu gewährleisten; Die Unterschiede im pH-Wert und in der Ionenstärke zwischen dem Gleichgewichtspuffer und dem Elutionspuffer sollten nicht zu groß sein, um eine Proteinfällung zu vermeiden; Zeichnen Sie die Leitfähigkeit oder den pH-Wert der Pufferlösung nach jeder Reinigung auf, um Vergleiche zwischen den Chargen zu ermöglichen. Durch systematische Aufzeichnungen und rechtzeitige Anpassungen kann HEPES als zuverlässige und einfach zu bedienende Pufferwahl in der Protein-Chromatographie dienen und die meisten konventionellen Reinigungsanforderungen erfüllen.Als Hersteller von biologischen Puffermitteln überwacht Desheng streng die Produktqualität und hat eine Qualitätsabteilung eingerichtet, die Produktchargen inspiziert. Erst wenn Verpackung und Qualität den Standards entsprechen, können sie das Werk verlassen. Daher hat Desheng einstimmiges Lob von Kunden erhalten. Wenn Sie relevante Absichten haben, klicken Sie bitte auf die Website, um Details zu erfahren und zu kaufen!