Padroneggia i passaggi chiave dell'etichettatura per dissoluzione di esteri di acridina

Nell'immunoassay per la chemioluminescenza, l'estere di acridina è un marcatore luminescente diretto ampiamente utilizzato per il rilevamento di vari elementi come ormoni, marcatori tumorali, immunoglobuline, ecc.Tuttavia, dalle polveri liofilizzate ai marcatori attivi in grado di legarsi stabilmente alle proteine o agli acidi nucleici, i processi di dissoluzione e di etichettatura intermedie richiedono un rigoroso controllo delle condizioni.La comprensione e la padronanza di questi punti operativi è un prerequisito per ottenere marcatori altamente attivi.

Condizioni di dissoluzione e selezione dei solventi non protonici

Gli esteri di acridina sono generalmente forniti sotto forma di polvere liofilizzata e conservati a bassa temperatura e in condizioni scure.Sebbene l'estere di acridina sia stato introdotto con gruppi antiidrolisi e idrofili attraverso il design molecolare, e l'ambiente di rilevazione finale è anch'esso una soluzione acquosa, il passo di dissoluzione deve essere rigorosamente anidro.Ciò è dovuto al fatto che l' acido carbossilico alla fine della molecola dell' estere di acridina è legato alla N-idrossisuccinimide per formare un estere attivoSe disciolto direttamente in un solvente contenente acqua, l'estere attivato si idrolizzerà prematuramente e perderà la sua capacità di accoppiarsi con le proteine.

Pertanto, gli esteri di acridina devono essere sciolti utilizzando solventi non protonati.DMF e DMSO possono efficacemente sciogliere gli esteri di acridina senza partecipare a reazioni di trasferimento di protoni e senza danneggiare la struttura dell'ester attivatoNel DMF, la concentrazione di dissoluzione dell'estere di acridina può raggiungere circa 4 millimoli per litro; la solubilità è maggiore nel DMSO, circa 10 milligrammi per millilitro.Secondo la scala di etichettatura richiesta per l'esperimento, possono essere selezionati solventi e volumi di dissoluzione adeguati.

Reazione di marcatura e formazione di legame amidico

Il gruppo NHS attaccato alla molecola dell'estere di acridina è la chiave della reazione di etichettatura.che formano legami amidici stabili in condizioni mite durante la rimozione della N-idrossisuccinimideUna volta completata la reazione, l'estere di acridina è saldamente attaccato alla sostanza etichettata attraverso legami covalenti come legami amidici o legami esterici.

L'efficienza e la specificità della reazione di etichettatura dipendono da diversi fattori: il valore del pH del sistema di reazione, il tempo di reazione e il rapporto molare tra estere di acridina e proteine.deve essere eseguito in condizioni debolmente alcaline per promuovere l'attacco nucleofilo del gruppo amino, ma il pH non deve essere troppo alto per impedire l'idrolisi o la decomposizione dell'estere di acridina stesso.il coniugato etichettato deve essere separato dall'estere libero di acridina non reagito, di solito utilizzando metodi come le colonne di desalinizzazione o la dialisi.

Immagazzinamento e manipolazione dopo la marcatura

Dopo aver formato un legame covalente con la sostanza etichettata, la stabilità chimica dell'estere di acridina è significativamente migliorata rispetto all'estere libero attivato.Il coniugato etichettato può esistere stabilmente in soluzione tampone debolmente acidaSoprattutto per i derivati di esteri di acridina contenenti gruppi idrofili e resistenti all'idrolisi, essi possono persino rimanere stabili in soluzioni acquose neutre.

Va notato che la struttura luminescente del nucleo dell'estere di acridina è ancora instabile in ambienti alcalini e ossidativi.il coniugato etichettato deve essere conservato in un sistema tampone debolmente acido e l'ossigeno deve essere escluso per quanto possibile durante la conservazione e l'usoSe necessario, il gas azoto può essere utilizzato per rimuovere l'ossigeno disciolto dalla soluzione evitando la luce per prolungare la durata del marcatore.

Selezione di vari derivati degli esteri di acridina

Esistono più di un tipo di esteri di acridina disponibili per la selezione.e diversi gruppi di etichettatura sono utilizzati anche per adattarsi a diversi tipi di molecole bersaglio. I prodotti etichettati con esteri NHS sono adatti alla coniugazione amino con le proteine; l' acido carbossilico acridino deve essere accoppiato con le proteine attraverso un agente di condensazione;Acrilammide idrazide coppie aldeide contenenti polisaccaridi con acidi nucleici attraverso gruppi aminatici liberi.

La comprensione dei requisiti di dissoluzione e dei principi di etichettatura degli esteri di acridina è la base per preparare con successo i marcatori chimiluminescenti.Ltda.. può fornire una varietà di prodotti a base di esteri di acridina, compresi gli esteri NHS, gli acidi acridini carbossilici e l'idrazide di acridina, adatti a diverse esigenze di etichettatura.Se avete bisogno di acquistare qualcosa di recente, per favore clicca sul sito ufficiale di Desheng per saperne di più!