Un approccio versatile agli esperimenti di acidi nucleici e proteine - analisi completa delle caratteristiche del tampone Tris

Tris (Tribase) è una base debole e la sua soluzione acquosa presenta caratteristiche alcaline. Quando si preparano soluzioni tampone, per regolare il valore del pH viene solitamente utilizzato acido cloridrico anziché idrossido di sodio. Le molecole Tris contengono un gruppo amminofunzionale, che consente loro di subire reazioni di condensazione con le aldeidi. Pertanto, nei sistemi sperimentali contenenti componenti aldeidici, come alcuni fissativi o sistemi di reazione di reticolazione, è necessario prestare particolare attenzione all'uso del tampone Tris per evitare di influenzare i risultati della reazione o causare la formazione di precipitazioni. Inoltre, Tris ha un valore pKa di circa 8,1 e subisce un notevole spostamento con la temperatura: per ogni grado di diminuzione della temperatura, il valore pKa aumenta di circa 0,03 unità. Questa caratteristica significa che negli esperimenti a bassa o alta temperatura, il pH della soluzione tampone deve essere ricalibrato, altrimenti potrebbe discostarsi dall'intervallo previsto.

UNvantaggi e applicazioni negli esperimenti sugli acidi nucleici

L'intervallo di pH del tampone Tris è sbilanciato da neutro a debolmente alcalino (il pH di lavoro comune è 7,0-9,0), che favorisce il processo di deprotonazione delle molecole di acido nucleico di DNA e RNA. I gruppi fosfato sulle molecole di acido nucleico trasportano cariche negative in condizioni debolmente alcaline, aumentando la repulsione elettrostatica tra le molecole e migliorando così la solubilità degli acidi nucleici nelle soluzioni acquose. Proprio per questa sua caratteristica il Tris diventa un buon solvente per gli acidi nucleici e può essere utilizzato anche per la dissoluzione delle proteine. In vari esperimenti che coinvolgono l'acido nucleico, come l'estrazione del DNA, la preparazione del sistema di reazione PCR, la purificazione dell'acido nucleico, ecc., il tampone Tris è spesso la scelta preferita.

Nelle applicazioni pratiche, il tampone tris cloridrato viene spesso utilizzato in combinazione con EDTA per formare il tampone TE (10 mM Tris HCl, 1 mM EDTA, pH 8,0). L'EDTA può chelare gli ioni metallici (come Mg ² ⁺, Ca ² ⁺), inibendo così l'attività delle nucleasi che richiedono ioni metallici come cofattori. Rallentando il processo di degradazione degli acidi nucleici, il tampone TE migliora significativamente la stabilità del DNA e dell'RNA durante la conservazione e la manipolazione. Inoltre, nella preparazione del tampone per elettroforesi, i ricercatori utilizzano spesso acido acetico o acido borico invece dell'acido cloridrico, ottenendo così il tampone TAE (acido tris acetico EDTA) e il tampone TBE (acido tris borico EDTA) adatti per l'elettroforesi degli acidi nucleici. Il tampone TAE è adatto per la separazione di frammenti di DNA più grandi e ha un elevato tasso di recupero; Il tampone TBE funziona bene nell'elettroforesi di acidi nucleici di piccoli frammenti e nei serbatoi di elettroforesi che sono stati utilizzati più volte per lungo tempo e la sua capacità tampone è più duratura.

Esperimenti sulle proteine ​​e altre applicazioni

Oltre agli esperimenti relativi agli acidi nucleici, il tampone Tris è stato ampiamente utilizzato anche nel campo della ricerca sulle proteine. Ad esempio, Tris può fungere da sistema tampone stabile per esperimenti di cristallizzazione delle proteine, analisi di stabilità o test di attività enzimatica in diverse condizioni di pH. A causa dell'assenza di ioni metallici e della bassa forza ionica complessiva nel tampone Tris, è stato applicato nell'esperimento sulla formazione di fibre intermedie nella fibronectina nucleare dei nematodi. La bassa forza ionica aiuta a mantenere l'integrità di specifiche strutture proteiche, evitando interferenze o fenomeni di aggregazione proteica che potrebbero essere causati da ioni metallici. Allo stesso tempo, Tris è anche comunemente usato nel tampone di gel e nel tampone di elettroforesi (come il sistema tampone di glicina Tris) dell'elettroforesi su gel di poliacrilammide SDS e svolge un ruolo importante nella determinazione e separazione del peso molecolare delle proteine.

Precauzioni per l'uso

Sebbene il tampone Tris abbia una vasta gamma di applicazioni, le limitazioni apportate dalle sue proprietà chimiche devono ancora essere considerate in esperimenti specifici. Come accennato in precedenza, i gruppi amminici nelle molecole Tris possono reagire con i gruppi aldeidici. Pertanto, nei sistemi contenenti fissativi aldeidici come formaldeide e glutaraldeide, l'efficacia della soluzione tampone può essere influenzata e persino interferire con i successivi esperimenti di colorazione o ibridazione. Nel frattempo, Tris ha un certo effetto inibitorio su alcuni enzimi, come alcune fosfatasi, e dovrebbe essere selezionato con attenzione nel rilevamento dell'attività enzimatica correlata. Inoltre, Tris può influenzare i metodi di determinazione delle proteine ​​a concentrazioni più elevate (come il metodo Bradford) e si consiglia di eseguire la quantificazione dopo la diluizione del campione o la sostituzione del tampone. Per sfruttare appieno i vantaggi della soluzione tampone Tris sono necessari una selezione ragionevole del sistema tampone e un aggiustamento basato su esigenze sperimentali specifiche.

In qualità di produttore di triidrossimetilamminometano,Deshengpuò fornire oltre il 99% delle polveri di materie prime con prestazioni stabili e piccole differenze di lotto, il che è altamente riconosciuto dal mercato. Se hai intenzioni rilevanti, fai clic sul sito Web per richiedere informazioni sui dettagli e acquistare!