Универсальный подход к испытаниям нуклеиновых кислот и белков - полный анализ характеристик буфера Tris

Трис (Трис-базаПри приготовлении буферных растворов для регулирования значения pH обычно используется соляная кислота, а не гидроксид натрия.Молекулы триса содержат аминофункциональную группуПоэтому в экспериментальных системах, содержащих альдегидные компоненты, такие как определенные фиксаторы или системы перекрестных связей,Особое внимание следует уделить использованию буфера Tris, чтобы избежать воздействия на результаты реакции или образования осадков.Кроме того, Tris имеет значение pKa приблизительно 8,1 и подвергается заметному сдвигу с температурой - с каждым уровнем снижения температуры значение pKa увеличивается примерно на 0.03 единицЭта характеристика означает, что при экспериментах при низкой или высокой температуре pH буферного раствора необходимо перекалибровывать, иначе он может отклоняться от ожидаемого диапазона.

А.Преимущества и применение в испытаниях нуклеиновой кислоты

Диапазон pH буфера Tris склонен к нейтральному и слабо щелочному (общий рабочий pH составляет 7,0 - 9,0), что способствует процессу депротонирования молекул нуклеиновой кислоты ДНК и РНК.Фосфатные группы на молекулах нуклеиновых кислот несут отрицательные заряды в слабо щелочных условиях, повышая электростатическое отталкивание между молекулами и тем самым улучшая растворимость нуклеиновых кислот в водных растворах.Именно из-за этой характеристики Трис становится хорошим растворителем для нуклеиновых кислот и может также использоваться для растворения белка.В различных экспериментах, связанных с нуклеиновой кислотой, таких как экстракция ДНК, подготовка реакционной системы ПЦР, очистка нуклеиновой кислоты и т. д., Трис-буфер часто является предпочтительным выбором.

В практическом применении буфер Tris гидрохлорида часто используется в сочетании с EDTA для образования буфера TE (10 мМ Tris HCl, 1 мМ EDTA, pH 8,0).,тем самым ингибируя активность нуклеаз, которые требуют ионов металлов в качестве кофакторов. замедляя процесс разложения нуклеиновых кислот,TE буфер значительно повышает стабильность ДНК и РНК во время хранения и обращенияКроме того, при подготовке буфера электрофореза исследователи часто используют уксусную или борную кислоту вместо соляной кислоты,Таким образом, получается буфер TAE (Tris acetic acid EDTA) и буфер TBE (Tris boric acid EDTA), подходящий для электрофореза нуклеиновой кислоты. буфер TAE подходит для отделения более крупных фрагментов ДНК и имеет высокую скорость восстановления;TBE буфер хорошо работает в небольших фрагментах электрофореза нуклеиновой кислоты и электрофорезы резервуаров, которые использовались несколько раз в течение длительного времени, и его буферная способность более прочная.

Эксперименты с белками и другие применения

В дополнение к экспериментам, связанным с нуклеиновыми кислотами, буфер Tris также широко используется в области исследования белков.Трис может служить стабильной буферной системой для протеиновых кристаллизационных экспериментов, анализ стабильности или анализ активности ферментов при различных условиях pH. Из-за отсутствия ионов металлов и низкой общей ионной прочности буфера Tris,он был использован в эксперименте по образованию промежуточных волокон в ядерном фибронектине нематодаНизкая ионная прочность помогает сохранить целостность специфических белковых структур, избегая интерференций или феноменов агрегации белков, которые могут быть вызваны ионами металлов.Tris также обычно используется в гелебуфере и буфере электрофореза (например, в буферной системе глицина Tris) для электрофореза геля полиакриламида SDS., и играет важную роль в определении и разделении молекулярной массы белка.

Предупреждения по применению

Хотя буфер Tris имеет широкий спектр применений, ограничения, связанные с его химическими свойствами, все еще должны быть рассмотрены в конкретных экспериментах.аминогруппы в молекулах Триса могут реагировать с альдегидными группамиПоэтому в системах, содержащих альдегидные фиксаторы, такие как формальдегид и глутаралдегид, эффективность буферного раствора может быть нарушена.и даже мешают последующим опытам окрашивания или гибридизации.Между тем, Tris оказывает определенное ингибирующее действие на некоторые ферменты, такие как некоторые фосфатазы, и должен быть тщательно выбран при обнаружении соответствующей активности ферментов.Трис может влиять на методы определения белка при более высоких концентрациях (например, метод Брэдфорда), и рекомендуется проводить количественное определение после разведения образца или замены буфера.Разумный выбор системы буфера и корректировка на основе конкретных экспериментальных потребностей необходимы для полного использования преимуществ буферного раствора Tris..

Как производитель тригидроксиметиламинометана,Дешенгможет поставлять более 99% порошков сырья с стабильной производительностью и небольшими различными партиями, что высоко признано рынком.Пожалуйста, нажмите на веб-сайт, чтобы узнать о деталях и покупке!