?
2026-10-19
Откройте любой шкаф с реагентом в лаборатории клеточной культуры, и в буферном отсеке обычно будет больше одной бутылки.HEPES, MOPS и PIPES относятся к семейству буферов Good, но каждый имеет свою собственную позицию.
1Как появился буфер Гуда?
В 1966 году Норман Гуд и его коллеги опубликовали статью в журнале Biochemistry, систематически внедряя класс звиттерионных буферирующих агентов, разработанных специально для биологических исследований.До этого, обычно используемые фосфаты, бораты и цитраты в экспериментах имели очевидные недостатки: некоторые из них оседали с металлическими ионами,некоторые могут проникать в клеточные мембраны и мешать метаболизму, а некоторые имели сильную абсорбцию в ультрафиолетовом диапазоне и препятствовали обнаружению.
Конструкция буфера Гуда основана на четких принципах, среди которых наиболее ценными для выбора являются:
PKa близка к физиологическому pH и охватывает оптимальный диапазон для большинства биохимических реакций.
Хорошая растворимость в воде, легко подготавливаемое резервное раствор высокой концентрации
Низкая проницаемость клеточной мембраны затрудняет проникновение в клетку и мешает метаболизму
Слабая хелатирующая способность ионов металлов не влияет на ферменты, которые зависят от кофакторов металлов
Химические свойства стабильны, а pKa мало меняется с температурой и ионной прочностью
Нет значительной ультрафиолетовой абсорбции выше 230 нм, не мешает спектроскопическому обнаружению
Эти шесть критериев по-прежнему являются основной основой для оценки применимости буферных агентов.
2"Координаты" трех членов
Поле сравнения
HEPES
MOPS
ТРУБКИ
pKa(25°C)
Около семи.5
Около семи.2
Около шести.8
Эффективный диапазон буфера
6.8–8.2
6.5–7.9
6.1–7.5
ΔpKa/°C
О−0.014
О−0.011
Около 0.009
Связывание ионов металлов
чрезвычайно низкий
чрезвычайно низкий
чрезвычайно низкий
Растворимость в воде
Хорошо.
Хорошо.
Плохая, требует помощи алкального растворения
Год присоединения
1966
1972
1966
3Перевести параметры в применимость
HEPES - универсальный выбор для физиологических сценариев pH.5, охватывающий 6,8-8.2Температурный коэффициент небольшой.и изменение pH, вызванное разницей температуры внутри и снаружи инкубатора, также меньшеЭто также причина, почему он наиболее широко используется в клеточной культуре.
MOPS - слегка кислые сценарии и альдегидные системы.9, который является почти стандартной конфигурацией в РНК электрофорезе. Он также имеет преимущество, которое часто игнорируется: в молекуле нет аминокислоты, поэтому он не участвует в альдегидных реакциях,и он более подходит, чем буфер, содержащий амино в модифицированной гелевой системе на основе формальдегидаСледует отметить, что раствор может желтеть после длительного хранения, но его буферная способность не влияет.
PIPES - нейтральный кислотный интервал и фиксатор для электронной микроскопии.5Это широко используемое буферирующее средство для фиксаторов электронной микроскопии (приблизительно pH 7,3), которое может уменьшить потерю липидов во время подготовки образца.Но есть два момента, на которые следует обратить внимание при использованииВо-первых, свободная кислота плохо растворима в воде. Во время приготовления ее следует перемешивать, добавляя щелочи, пока она не растворится, а не растворяться сначала в воде, а затем добавлять щелочи.может образовывать свободные радикалы и не подходит для исследований, связанных с окислением.
4Три легко упускаемые из виду различия.
Помимо pKa, на этапе экспериментального проектирования следует подтвердить три момента:
Растворимость: ПИПЕС требует щелочной растворимости, и этапы приготовления относительно просты по сравнению с двумя другими громоздкими HEPES и MOPS.
Редоксификационная чувствительность. HEPES и PIPES, содержащие кольца пиперазина, могут генерировать свободные радикалы или перекись водорода в определенных условиях.обнаружение реактивных видов кислорода, или долгосрочные световые изображения требуют тщательной оценки, и при необходимости следует использовать MOPS.
Есть доказательства того, что HEPES может влиять на количественное определение белка с помощью метода Лоури.рекомендуется непосредственно проверить официальную таблицу совместимости вместо того, чтобы полагаться на опыт.
5Как выбрать: простой путь решения
Целевое рН падает между 7,2-7.4, требующие работы вне инкубатора→Приоритетное внимание следует уделить HEPES
Экспериментальная система содержит альдегидные фиксаторы или включает в себя электрофорез РНК-денатурации.→Предпочтительно MOPS
Целевое pH слегка кислое (6,5-7,2), используется для подготовки образцов для электронной микроскопии→Предпочтительнее использовать трубы.
Эксперимент включает в себя окислительные реакции или реактивные виды кислорода→избегать пиперазинных буферных агентов кольца, учитывая MOPS
Следует отметить, что эти три не исключают друг друга в фактических экспериментах.Суть выбора не в том, кто лучше, но "при каких условиях этот шаг проводится".
6Возвращение от отбора к сырьевым материалам
Независимо от того, какой из них будет выбран в конечном итоге, окончательным тестом на продукте будет консистенция партии.и ультрафиолетового поглощения буферирующих агентов все повлияет на стабильность экспериментов и реагентов.
Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. (ранее известная как Wuhan Desheng Biochemical Technology Co., Ltd.)был создан в 2005 году) уже давно занимается исследованиями и производством биологических буферных агентов и связанных с ними мелких химических веществ.Система продуктов охватывает более 50 моделей, включая HEPES,MOPSКомпания имеет штаб-квартиру в Гуангу Объединенный город науки и технологий,Зона развития ГедианОн имеет две научно-исследовательские производственные базы, Gedian (54 акров) и Huanggang (70 акров), с годовой производственной мощностью 5000 тонн для всех категорий.Ее продукты используются в диагностике ИВД in vitro, биомедицины и повседневной химической промышленности.
Подробнее