Punti chiave e controllo dei rischi dell'applicazione di HEPES in un sistema di coltura cellulare

Nome 7365-45-9prodotto

Acido 4-idrossietilpiperazina etansolfonico

Abbreviazione Peso HEPES buffer

Numero

CAS7365-45-9Aspetto

del

Considerazione della fotosensibilità e della citotossicitàPolvere cristallina biancaPeso molecolare

238.305

L'HEPES viene solitamente acquistato in polvere o in forma liquida pre-preparata. Quando si sciolgono prodotti in polvere, è necessario agitare accuratamente e confermare che il pH soddisfi lo standard, poiché il rapporto tra forma acida e forma basica dell'HEPES influisce direttamente sull'acidità e sull'alcalinità della soluzione. La filtrazione e la sterilizzazione sono passaggi necessari nella preparazione della soluzione di HEPES di grado per coltura cellulare. La sterilizzazione ad alta temperatura e alta pressione può causare la degradazione molecolare e scurire il colore della soluzione, rendendola inadatta all'uso. Il tampone HEPES preparato o il terreno di coltura completo contenente HEPES deve essere conservato al buio e refrigerato, e si raccomanda di utilizzarlo entro un periodo di tempo ragionevole per evitare contaminazioni microbiche o alterazioni delle proprietà chimiche causate da una conservazione a lungo termine. Osservare se la soluzione è limpida e il colore è normale prima di ogni utilizzo è un modo semplice ed efficace per confermare la qualità.di C8H18N2O4SDensità

1.07 g/mL a 20 °C

L'HEPES viene solitamente acquistato in polvere o in forma liquida pre-preparata. Quando si sciolgono prodotti in polvere, è necessario agitare accuratamente e confermare che il pH soddisfi lo standard, poiché il rapporto tra forma acida e forma basica dell'HEPES influisce direttamente sull'acidità e sull'alcalinità della soluzione. La filtrazione e la sterilizzazione sono passaggi necessari nella preparazione della soluzione di HEPES di grado per coltura cellulare. La sterilizzazione ad alta temperatura e alta pressione può causare la degradazione molecolare e scurire il colore della soluzione, rendendola inadatta all'uso. Il tampone HEPES preparato o il terreno di coltura completo contenente HEPES deve essere conservato al buio e refrigerato, e si raccomanda di utilizzarlo entro un periodo di tempo ragionevole per evitare contaminazioni microbiche o alterazioni delle proprietà chimiche causate da una conservazione a lungo termine. Osservare se la soluzione è limpida e il colore è normale prima di ogni utilizzo è un modo semplice ed efficace per confermare la qualità.di fusione234-238 °C

Condizioni

di conservazione

Temperatura ambiente, al riparo da luce e umidità

L'HEPES viene solitamente acquistato in polvere o in forma liquida pre-preparata. Quando si sciolgono prodotti in polvere, è necessario agitare accuratamente e confermare che il pH soddisfi lo standard, poiché il rapporto tra forma acida e forma basica dell'HEPES influisce direttamente sull'acidità e sull'alcalinità della soluzione. La filtrazione e la sterilizzazione sono passaggi necessari nella preparazione della soluzione di HEPES di grado per coltura cellulare. La sterilizzazione ad alta temperatura e alta pressione può causare la degradazione molecolare e scurire il colore della soluzione, rendendola inadatta all'uso. Il tampone HEPES preparato o il terreno di coltura completo contenente HEPES deve essere conservato al buio e refrigerato, e si raccomanda di utilizzarlo entro un periodo di tempo ragionevole per evitare contaminazioni microbiche o alterazioni delle proprietà chimiche causate da una conservazione a lungo termine. Osservare se la soluzione è limpida e il colore è normale prima di ogni utilizzo è un modo semplice ed efficace per confermare la qualità.Più del 99%Considerazione della fotosensibilità e della citotossicitàstandard

500g/bottiglia, 25kg/fusto di cartone

ProduttoreHubei XindeshengVantaggi unici negli scenari di coltura aperta

Durante l'osservazione microscopica a lungo termine, la preparazione di campioni per citometria a flusso o le operazioni su workstation per cellule vive, i piatti di coltura o le sospensioni cellulari devono spesso essere rimossi dall'ambiente dell'incubatore a CO

Considerazione della fotosensibilità e della citotossicità. A questo punto, il sistema tampone bicarbonato fallisce gradualmente a causa della mancanza di un costante apporto di anidride carbonica e il pH del terreno di coltura può variare. L'HEPES può mantenere il pH vicino al range fisiologico entro poche ore, fornendo una finestra temporale sufficiente per le operazioni sperimentali. Inoltre, nei sistemi di coltura senza siero o a basso contenuto di siero, la capacità tampone dell'HEPES aiuta a compensare la mancanza di componenti tampone naturali nel siero, specialmente per i tipi cellulari sensibili alle fluttuazioni acido-base.

Imballaggio fusti HEPES

Impatto potenziale sui componenti del sistema di coltivazioneDopo l'aggiunta di HEPES, la forza ionica e la pressione osmotica del terreno di coltura aumenteranno di conseguenza. Se altri componenti salini non vengono adeguatamente regolati durante la preparazione, la pressione osmotica può superare il range di tolleranza cellulare, influenzando il tasso di adesione o il tasso di proliferazione cellulare. Nel frattempo, sebbene l'effetto di coordinazione debole dell'HEPES sui cationi bivalenti come calcio e magnesio non sia significativo come quello del fosfato, può comunque alterare la concentrazione effettiva di questi ioni in condizioni di alta concentrazione, interferendo così con la normale funzione delle molecole di adesione cellulare e dei canali ionici. Per esperimenti che si basano su una rigorosa regolazione della segnalazione del calcio, è necessario valutare se l'aggiunta di HEPES abbia effetti osservabili sul fenotipo.Considerazione della fotosensibilità e della citotossicitàL'HEPES può decomporsi lentamente e produrre specie reattive dell'ossigeno in condizioni di luce, il che dovrebbe essere preso in debita considerazione negli esperimenti di imaging di cellule vive. Quando il piatto di coltura è esposto alla luce di eccitazione del microscopio per lungo tempo, le molecole locali di HEPES possono subire reazioni fotochimiche, portando all'accumulo di perossido di idrogeno nel microambiente di coltura e causando danni da stress alle cellule sensibili. La ricerca ha dimostrato che alcune cellule nervose o linee di cellule staminali mostrano risposte più pronunciate a questo tipo di stress ossidativo. Inoltre, l'HEPES stesso non ha una tossicità significativa per la maggior parte delle linee cellulari alle concentrazioni convenzionali, ma se supera il limite superiore raccomandato o viene utilizzato in combinazione con alcuni  vettori (come il dimetilsolfossido), la sua compatibilità cellulare deve essere verificata separatamente.

Punti chiave per le operazioni di preparazione e conservazione

L'HEPES viene solitamente acquistato in polvere o in forma liquida pre-preparata. Quando si sciolgono prodotti in polvere, è necessario agitare accuratamente e confermare che il pH soddisfi lo standard, poiché il rapporto tra forma acida e forma basica dell'HEPES influisce direttamente sull'acidità e sull'alcalinità della soluzione. La filtrazione e la sterilizzazione sono passaggi necessari nella preparazione della soluzione di HEPES di grado per coltura cellulare. La sterilizzazione ad alta temperatura e alta pressione può causare la degradazione molecolare e scurire il colore della soluzione, rendendola inadatta all'uso. Il tampone HEPES preparato o il terreno di coltura completo contenente HEPES deve essere conservato al buio e refrigerato, e si raccomanda di utilizzarlo entro un periodo di tempo ragionevole per evitare contaminazioni microbiche o alterazioni delle proprietà chimiche causate da una conservazione a lungo termine. Osservare se la soluzione è limpida e il colore è normale prima di ogni utilizzo è un modo semplice ed efficace per confermare la qualità.Progettazione sperimentale e coerenza dei lotti

Possono esserci differenze nei residui di impurità e nella purezza tra i prodotti HEPES di diversi fornitori o lotti. Per esperimenti continui che tracciano i cambiamenti nel fenotipo cellulare o nei prodotti di secrezione a lungo termine, si raccomanda di fissare la fonte e il numero di lotto, ed eseguire test comparativi paralleli quando si cambiano i lotti. In caso di fluttuazioni anomale nel comportamento cellulare o negli indicatori biochimici durante l'esperimento, la modifica del numero di lotto di HEPES dovrebbe essere inclusa come uno dei fattori di screening. Inoltre, indicare la concentrazione specifica, la data di preparazione e le condizioni di conservazione dell'HEPES quando si scrivono i registri sperimentali può aiutare a migliorare la tracciabilità dell'esperimento.