Applicazione e precauzioni di HEPES in esperimenti relativi agli acidi nucleici

HEPES, Il nome completo è acido 4-idrossietil piperazina etansolfonico noto anche come acido 4-(2-idrossietil)-1-piperazinetansolfonico, con numero CAS 7365-45-9. Essendo un tampone chimico zwitterionico non volatile, l'HEPES è ampiamente considerato uno degli eccellenti tamponi universali nel campo della ricerca biologica. Appartiene alla famosa famiglia dei reagenti tamponanti biologici di Good e possiede un'eccellente capacità tamponante a pH fisiologico.

I prodotti HEPES (grado per coltura cellulare) sviluppati e prodotti in modo indipendente da Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. sono ampiamente utilizzati in campi di ricerca scientifica e produzione come coltura cellulare, purificazione proteica, biologia molecolare, ecc., con elevata purezza, bassi endotossine e processo stabile come loro vantaggi principali.

1. Informazioni di base

1.1 Proprietà chimiche e tamponanti

1.2 Prestazioni di tamponamento

Il valore di pKa dell'HEPES è di circa 7,5 (25 °C) e l'intervallo di tamponamento efficace è pH 6,8-8,2. Mostra una forte capacità tamponante nell'intervallo di pH 6,0-8,5. Soprattutto nell'intervallo fisiologico di pH 7,2-7,4 ottimale per la coltura cellulare, la sua capacità tamponante è molto superiore a quella delle soluzioni tampone fosfato o carbonato.

Imballaggio Hepes 

Come membro della famiglia dei tamponi di Good, l'HEPES possiede eccellenti caratteristiche come elevata solubilità in acqua, bassa permeabilità alle membrane cellulari, costante di dissociazione acido-base stabile, bassa capacità chelante con ioni metallici, elevata stabilità chimica e basso assorbimento nelle regioni UV e della luce visibile.

2. Vantaggi principali

2.1 Un sistema tampone che non dipende da CO ₂

I terreni di coltura cellulare tradizionali si basano su un sistema tampone bicarbonato/CO ₂ per mantenere l'equilibrio del pH. Una volta aperto l'incubatore a CO ₂, si verificheranno forti fluttuazioni del pH. La capacità tamponante dell'HEPES è indipendente dalla concentrazione di CO ₂. Quando le cellule vengono divise in flaconi, passate o osservate al microscopio in una cappa di sicurezza biologica, il terreno di coltura contenente HEPES può mantenere la stabilità del pH in un ambiente aperto per diverse ore, proteggendo efficacemente le cellule dai danni dell'ambiente alcalino.

2.2 Eccellente biocompatibilità

Alle tipiche concentrazioni di lavoro (10-25 mM), l'HEPES mostra una buona tolleranza alla maggior parte delle linee cellulari e non ha effetti tossici significativi sulle cellule. L'HEPES ha stabilità chimica ed enzimatica e non penetra le membrane cellulari, rendendolo altamente adatto per l'aggiunta ai terreni di coltura cellulare.

2.3 Eccellente stabilità termica

A differenza del Tris e di altre soluzioni tampone, il valore di pKa dell'HEPES mostra una minima variazione di temperatura (-0,014/°C) e mantiene una capacità tamponante stabile nell'intervallo di temperatura sperimentale da 4 °C a 37 °C. Questa caratteristica gli consente di mantenere bene la struttura e la funzione dell'enzima anche in condizioni di bassa temperatura.

2.4 Amico degli ioni metallici

L'HEPES non chelata con ioni metallici comuni come Ca ² ⁺ e Mg ² ⁺, e non interferisce con l'attività enzimatica dipendente da ioni metallici, rendendolo adatto per sistemi sperimentali correlati agli ioni metallici.

3. Scenari applicativi

3.1  Coltura cellulare

L'HEPES è ampiamente utilizzato nella coltura di cellule di mammifero, ingegneria tissutale e altre ricerche. La concentrazione di lavoro comunemente utilizzata è 10-25 mM. Rispetto ai sistemi tampone inorganici a base di bicarbonato, l'HEPES mostra una capacità di controllo del pH superiore nella coltura di tessuti o organi. Soprattutto negli scenari in cui le cellule devono essere processate al di fuori dell'incubatore a CO ₂ per lungo tempo, l'aggiunta di HEPES può aumentare significativamente la capacità tamponante del terreno di coltura. La coltura convenzionale, l'incubazione a lungo termine, nonché gli esperimenti di migrazione/invasione cellulare e Transwell di cellule sensibili (come cellule primarie, cellule staminali, cellule tumorali) possono essere mantenuti aggiungendo HEPES per mantenere l'omeostasi cellulare.

3.2  Purificazione ed estrazione proteica

L'HEPES è un componente comune dei tamponi di legame e dei tamponi di lisi nella ricerca sulle proteine. Ha un'ampia gamma di applicazioni in processi biologici come la purificazione di anticorpi, sostanze bioattive, proteine e fattori di crescita.

3.3  Elettroforesi e Biologia Molecolare

L'HEPES può essere utilizzato nel tampone per elettroforesi su gel, nella manipolazione di DNA/RNA e in altri esperimenti di biologia molecolare.

3.4  Altre applicazioni

L'HEPES può anche essere utilizzato come soluzione elettrolitica bifasica per l'elettroforesi a punto isoelettrico, un sistema tampone per osservare la deposizione proteica al microscopio elettronico e un reagente tampone per la determinazione quantitativa e selettiva delle reazioni antigene-anticorpo.

Polvere tampone HEPES

4. Specifiche del prodotto e controllo qualità HEPES di New Desheng

Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. è stata fondata nel 2005 ed è un'impresa nazionale high-tech specializzata nella ricerca, sviluppo, produzione e vendita di reagenti diagnostici in vitro e agenti tamponanti biologici. L'azienda ha una ricca accumulazione tecnica nel campo degli agenti tamponanti biologici, con prodotti che coprono decine di tipi comuni e personalizzati come TRIS, HEPES, MOPS, ecc., con una capacità produttiva giornaliera fino a 5 tonnellate.

Caratteristiche del prodotto Desheng

Elevata purezza: la purezza dell'HEPES di grado per coltura cellulare può raggiungere oltre il 99%

Bassi endotossine: rigorosi indicatori di controllo degli endotossine garantiscono il buon andamento degli esperimenti di coltura cellulare

Forma in polvere: facile da conservare e trasportare per lungo tempo. Al momento dell'uso, aggiungere acqua deionizzata e mescolare per sciogliere. Regolare al valore di pH desiderato con idrossido di sodio. Facile da preparare

Buona stabilità dei lotti: un rigoroso sistema di controllo qualità garantisce prestazioni costanti dei prodotti di diversi lotti

garanzia di qualità

Xindesheng aderisce alla filosofia aziendale "qualità prima di tutto, orientata al cliente", e i suoi prodotti sono rigorosamente testati secondo gli standard industriali. L'azienda sta attivamente costruendo una nuova fabbrica a Huanggang, impegnata nella creazione di una base nazionale per agenti tamponanti biologici di fascia alta, e nel migliorare ulteriormente la capacità produttiva e le capacità di garanzia della catena di approvvigionamento.

5. Precauzioni

5.1 L'HEPES raccomanda una concentrazione di lavoro di 10-25 mM. Una bassa concentrazione non è sufficiente a controllare efficacemente le fluttuazioni del pH, mentre un'alta concentrazione può causare tossicità a determinate cellule sensibili.

5.2 L'HEPES può interferire con gli esperimenti di quantificazione proteica Folin Ciocalteu, ma non influenzerà l'analisi di quantificazione proteica Biuret.

5.3 Il prodotto è in confezione non sterile. Se utilizzato per la coltura cellulare, si raccomanda di eseguire una filtrazione sterile prima dell'uso.

5.4 Si raccomanda di conservare a temperatura ambiente, al riparo dalla luce, dall'umidità e in un ambiente sigillato e asciutto.

Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. si impegna a fornire prodotti tampone biologici di alta qualità per la ricerca globale sulle scienze della vita e l'industria diagnostica in vitro. Se hai bisogno di saperne di più sui nostri prodotti o di ottenere campioni, non esitare a contattarci in qualsiasi momento.