Application et précautions de l'HEPES dans les expériences liées aux acides nucléiques

HEPES, Le nom complet est acide 4-hydroxyéthyl pipérazine éthanesulfonique également connu sous le nom d'acide 4-(2-hydroxyéthyl)-1-pipérazineéthanesulfonique, avec un numéro CAS de 7365-45-9. En tant que tampon chimique zwitterionique non volatil, le HEPES est largement considéré comme l'un des excellents tampons universels dans le domaine de la recherche biologique. Il appartient à la célèbre famille des réactifs de tamponnement biologique de Good et possède une excellente capacité de tamponnement dans des conditions de pH physiologique.

Les produits HEPES (qualité culture cellulaire) développés et produits indépendamment par Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. sont largement utilisés dans les domaines de la recherche scientifique et de la production tels que la culture cellulaire, la purification des protéines, la biologie moléculaire, etc., avec une grande pureté, une faible teneur en endotoxines et un procédé stable comme avantages principaux.

1. Informations de base

1.1 Propriétés chimiques et de tamponnement

1.2 Performance de tamponnement

La valeur du pKa du HEPES est d'environ 7,5 (25 ° C), et la plage de tamponnement efficace est de pH 6,8-8,2. Il présente une forte capacité de tamponnement dans la plage de pH de 6,0-8,5. Surtout dans la plage physiologique de pH 7,2-7,4 optimale pour la culture cellulaire, sa capacité de tamponnement est beaucoup plus élevée que celle des solutions tampons phosphate ou carbonate.

Emballage de Hepes 

En tant que membre de la famille des tampons de Good, le HEPES possède d'excellentes caractéristiques telles qu'une haute solubilité dans l'eau, une faible perméabilité aux membranes cellulaires, une constante de dissociation acide-base stable, une faible capacité de chélation des ions métalliques, une haute stabilité chimique et une faible absorption dans les régions UV et de lumière visible.

2. Avantages principaux

2.1 Un système tampon qui ne dépend pas du CO ₂

Les milieux de culture cellulaire traditionnels dépendent d'un système tampon bicarbonate/CO ₂ pour maintenir l'équilibre du pH. Une fois l'incubateur à CO ₂ ouvert, il y aura de fortes fluctuations de pH. La capacité de tamponnement du HEPES est indépendante de la concentration de CO ₂. Lorsque les cellules sont divisées en flacons, repiquées ou observées au microscope dans une hotte de sécurité biologique, le milieu de culture contenant du HEPES peut maintenir la stabilité du pH dans un environnement ouvert pendant plusieurs heures, protégeant efficacement les cellules des dommages causés par un environnement alcalin.

2.2 Excellente biocompatibilité

Aux concentrations de travail typiques (10-25 mM), le HEPES présente une bonne tolérance pour la plupart des lignées cellulaires et n'a pas d'effets toxiques significatifs sur les cellules. Le HEPES a une stabilité chimique et enzymatique et ne peut pas pénétrer les membranes cellulaires, ce qui le rend très adapté à l'ajout aux milieux de culture cellulaire.

2.3 Excellente stabilité thermique

Contrairement au Tris et à d'autres solutions tampons, la valeur du pKa du HEPES présente une variation minimale de température (-0,014/° C) et maintient une capacité de tamponnement stable dans la plage de température expérimentale de 4 ° C à 37 ° C. Cette caractéristique lui permet de bien maintenir la structure et la fonction de l'enzyme même dans des conditions de basse température.

2.4 Respectueux des ions métalliques

Le HEPES ne chélate pas avec les ions métalliques courants tels que Ca ² ⁺ et Mg ² ⁺, et n'interfère pas avec l'activité enzymatique dépendante des ions métalliques, ce qui le rend adapté aux systèmes expérimentaux liés aux ions métalliques.

3. Scénarios d'application

3.1  Culture cellulaire

Le HEPES est largement utilisé dans la culture de cellules de mammifères, l'ingénierie tissulaire et d'autres recherches. La concentration de travail couramment utilisée est de 10-25 mM. Comparé aux systèmes tampons bicarbonate inorganiques, le HEPES présente une capacité de contrôle du pH supérieure dans la culture de tissus ou d'organes. Surtout dans les scénarios où les cellules doivent être traitées en dehors de l'incubateur à CO ₂ pendant une longue période, l'ajout de HEPES peut améliorer considérablement la capacité de tamponnement du milieu de culture. La culture conventionnelle, l'incubation à long terme, ainsi que les expériences de migration/invasion de cellules rampantes et Transwell de cellules sensibles (telles que les cellules primaires, les cellules souches, les cellules tumorales) peuvent être maintenues en ajoutant du HEPES pour maintenir l'homéostasie cellulaire.

3.2  Purification et extraction de protéines

Le HEPES est un composant courant des tampons de liaison et des tampons de lyse dans la recherche sur les protéines. Il a un large éventail d'applications dans les processus biologiques tels que la purification des anticorps, des substances bioactives, des protéines et des facteurs de croissance.

3.3  Électrophorèse et biologie moléculaire

Le HEPES peut être utilisé dans les tampons d'électrophorèse sur gel, la manipulation d'ADN/ARN et d'autres expériences de biologie moléculaire.

3.4  Autres applications

Le HEPES peut également être utilisé comme solution électrolytique biphasique pour l'électrophorèse isoélectrique, un système tampon pour observer la déposition de protéines sous microscope électronique, et un réactif tampon pour la détermination quantitative et sélective des réactions antigène-anticorps.

Poudre tampon HEPES

4. Spécifications et contrôle qualité des produits HEPES de New Desheng

Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. a été créée en 2005 et est une entreprise nationale de haute technologie spécialisée dans la recherche, le développement, la production et la vente de réactifs de diagnostic in vitro et d'agents de tamponnement biologique. L'entreprise possède une riche accumulation technique dans le domaine des agents de tamponnement biologique, avec des produits couvrant des dizaines de types courants et personnalisés tels que TRIS, HEPES, MOPS, etc., avec une capacité de production quotidienne allant jusqu'à 5 tonnes.

Caractéristiques des produits Desheng

Haute pureté : la pureté du HEPES de qualité culture cellulaire peut atteindre plus de 99%

Faible teneur en endotoxines : des indicateurs de contrôle stricts des endotoxines garantissent le bon déroulement des expériences de culture cellulaire

Forme poudre : facile à stocker et à transporter pendant une longue période. Lors de l'utilisation, ajouter de l'eau désionisée et remuer pour dissoudre. Ajuster au pH souhaité avec de l'hydroxyde de sodium. Facile à préparer

Bonne stabilité des lots : un système de contrôle qualité strict garantit la performance constante des produits de différents lots

assurance qualité

Xindesheng adhère à la philosophie d'entreprise « la qualité d'abord, le client au centre », et ses produits sont strictement testés selon les normes de l'industrie. L'entreprise construit activement une nouvelle usine à Huanggang, s'engageant à créer une base nationale pour les agents de tamponnement biologique haut de gamme, et à améliorer encore la capacité de production et les capacités de garantie de la chaîne d'approvisionnement.

5. Précautions

5.1 Le HEPES recommande une concentration de travail de 10-25 mM. Une faible concentration n'est pas suffisante pour contrôler efficacement les fluctuations de pH, tandis qu'une concentration élevée peut provoquer une toxicité pour certaines cellules sensibles.

5.2 Le HEPES peut interférer avec les expériences de quantification des protéines par Folin Ciocalteu, mais n'affectera pas l'analyse de quantification des protéines par Biuret.

5.3 Le produit est conditionné sans stérilité. S'il est utilisé pour la culture cellulaire, il est recommandé d'effectuer une filtration stérile avant utilisation.

5.4 Il est recommandé de stocker à température ambiante, à l'abri de la lumière, de l'humidité, et dans un environnement scellé et sec.

Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. s'engage à fournir des produits tampons biologiques de haute qualité pour la recherche en sciences de la vie mondiale et l'industrie du diagnostic in vitro. Si vous avez besoin d'en savoir plus sur nos produits ou d'obtenir des échantillons, n'hésitez pas à nous contacter à tout moment.