Aplicação e precauções do HEPES em experimentos relacionados a ácidos nucleicos

HEPES, O nome completo é ácido 4-hidroxietil piperazina etanossulfônico também conhecido como ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinetanossulfônico, com número CAS 7365-45-9. Como um tampão químico zwitteriônico não volátil, o HEPES é amplamente considerado um dos excelentes tampões universais no campo da pesquisa biológica. Pertence à famosa família de reagentes de tamponamento biológico de Good e possui excelente capacidade de tamponamento em condições de pH fisiológico.

Os produtos HEPES (Grau de Cultura de Células) desenvolvidos e produzidos independentemente pela Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. são amplamente utilizados em campos de pesquisa científica e produção, como cultura de células, purificação de proteínas, biologia molecular, etc., com alta pureza, baixo teor de endotoxinas e processo estável como suas principais vantagens.

1. Informações básicas

1.1 Propriedades químicas e de tamponamento

1.2 Desempenho de tamponamento

O valor de pKa do HEPES é de aproximadamente 7,5 (25 °C), e a faixa de tamponamento eficaz é de pH 6,8-8,2. Ele exibe forte capacidade de tamponamento na faixa de pH de 6,0-8,5. Especialmente na faixa fisiológica de pH 7,2-7,4, ideal para cultura de células, sua capacidade de tamponamento é muito maior do que a das soluções tampão de fosfato ou carbonato.

Embalagem de Hepes 

Como membro da família de tampões de Good, o HEPES possui excelentes características, como alta solubilidade em água, baixa permeabilidade à membrana celular, constante de dissociação ácido-base estável, baixa capacidade de quelação de íons metálicos, alta estabilidade química e baixa absorção nas regiões de luz UV e visível.

2. Vantagens principais

2.1 Um sistema tampão que não depende de CO ₂

Mídias tradicionais de cultura de células dependem de um sistema tampão de bicarbonato/CO ₂ para manter o equilíbrio do pH. Uma vez que a incubadora de CO ₂ é aberta, haverá flutuações severas no pH. A capacidade de tamponamento do HEPES é independente da concentração de CO ₂. Quando as células são divididas em frascos, passadas ou observadas microscopicamente em uma cabine de segurança biológica, a mídia de cultura contendo HEPES pode manter a estabilidade do pH em um ambiente aberto por várias horas, protegendo efetivamente as células de danos em ambiente alcalino.

2.2 Excelente biocompatibilidade

Em concentrações de trabalho típicas (10-25 mM), o HEPES exibe boa tolerância à maioria das linhagens celulares e não causa efeitos tóxicos significativos nas células. O HEPES possui estabilidade química e enzimática e não penetra nas membranas celulares, tornando-o altamente adequado para adição a mídias de cultura de células.

2.3 Excelente estabilidade de temperatura

Ao contrário do Tris e outras soluções tampão, o valor de pKa do HEPES apresenta variação mínima de temperatura (-0,014/°C) e mantém capacidade de tamponamento estável dentro da faixa de temperatura experimental de 4 °C a 37 °C. Essa característica permite que ele mantenha bem a estrutura e a função da enzima mesmo em condições de baixa temperatura.

2.4 Amigável a íons metálicos

O HEPES não quelata com íons metálicos comuns como Ca ² ⁺ e Mg ² ⁺, e não interfere na atividade enzimática dependente de íons metálicos, tornando-o adequado para sistemas experimentais relacionados a íons metálicos.

3. Cenários de aplicação

3.1  Cultura de células

O HEPES é amplamente utilizado em cultura de células de mamíferos, engenharia de tecidos e outras pesquisas. A concentração de trabalho comumente usada é de 10-25 mM. Comparado com sistemas tampão de bicarbonato inorgânico, o HEPES exibe capacidade superior de controle de pH em cultura de tecidos ou órgãos. Especialmente em cenários onde as células precisam ser processadas fora da incubadora de CO ₂ por longos períodos, a adição de HEPES pode aumentar significativamente a capacidade de tamponamento da mídia de cultura. A cultura convencional, incubação de longo prazo, bem como experimentos de migração/invasão de células rastejantes e Transwell de células sensíveis (como células primárias, células-tronco, células tumorais) podem ser mantidos pela adição de HEPES para manter a homeostase celular.

3.2  Purificação e extração de proteínas

O HEPES é um componente comum de tampão de ligação e tampão de lise em pesquisa de proteínas. Possui uma ampla gama de aplicações em processos biológicos, como purificação de anticorpos, substâncias bioativas, proteínas e fatores de crescimento.

3.3  Eletroforese e Biologia Molecular

O HEPES pode ser usado em tampão de eletroforese em gel, manipulação de DNA/RNA e outros experimentos de biologia molecular.

3.4  Outras aplicações

O HEPES também pode ser usado como uma solução eletrolítica bifásica para eletroforese de foco isoelétrico, um sistema tampão para observar a deposição de proteínas sob microscopia eletrônica e um reagente tampão para determinação quantitativa e seletiva de reações antígeno-anticorpo.

Pó tampão HEPES

4. Especificações do Produto HEPES e Controle de Qualidade da Nova Desheng

A Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. foi fundada em 2005 e é uma empresa nacional de alta tecnologia especializada em pesquisa, desenvolvimento, produção e vendas de reagentes de diagnóstico in vitro e agentes de tamponamento biológico. A empresa possui rica acumulação técnica no campo de agentes de tamponamento biológico, com produtos cobrindo dezenas de tipos comuns e personalizados como TRIS, HEPES, MOPS, etc., com uma capacidade de produção diária de até 5 toneladas.

Características do Produto Desheng

Alta pureza: A pureza do HEPES de grau de cultura de células pode atingir mais de 99%

Baixo teor de endotoxinas: Indicadores rigorosos de controle de endotoxinas garantem o progresso suave dos experimentos de cultura de células

Forma em pó: Fácil de armazenar e transportar por longos períodos. Ao usar, adicione água deionizada e mexa para dissolver. Ajuste para o valor de pH desejado com hidróxido de sódio. Fácil de preparar

Boa estabilidade de lote: sistema de controle de qualidade rigoroso garante o desempenho consistente de produtos de diferentes lotes

garantia de qualidade

A Xindesheng adere à filosofia de negócios de "qualidade em primeiro lugar, orientada para o cliente", e seus produtos são rigorosamente testados de acordo com os padrões da indústria. A empresa está construindo ativamente uma nova fábrica em Huanggang, comprometida em criar uma base doméstica para agentes de tamponamento biológico de ponta e aprimorar ainda mais a capacidade de produção e as capacidades de garantia da cadeia de suprimentos.

5. Precauções

5.1 O HEPES recomenda uma concentração de trabalho de 10-25 mM. Uma baixa concentração não é suficiente para controlar efetivamente as flutuações de pH, enquanto uma alta concentração pode causar toxicidade a certas células sensíveis.

5.2 O HEPES pode interferir em experimentos de quantificação de proteínas com Folin Ciocalteu, mas não afetará a análise de quantificação de proteínas com Biureto.

5.3 O produto está em embalagem não estéril. Se for usado para cultura de células, recomenda-se realizar filtração estéril antes do uso.

5.4 Recomenda-se armazenar em temperatura ambiente, longe da luz, umidade e em ambiente selado e seco.

A Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. está comprometida em fornecer produtos de tampão biológico de alta qualidade para a indústria global de pesquisa em ciências da vida e diagnóstico in vitro. Se você precisar saber mais sobre nossos produtos ou obter amostras, sinta-se à vontade para nos contatar a qualquer momento.