Para que experimentos o Tris de grau analítico pode ser usado e em quais cenários deve ser evitado

O grau analítico Tris é um dos mais utilizadostampões biológicosNo entanto, nem todas as experiências são adequadas para o grau analítico Tris,Uma vez que pode representar riscos ocultos que levem a falhas experimentais em certos cenáriosCompreender as aplicações e limitações adequadas do grau analítico Tris pode ajudar os investigadores a evitar erros desnecessários.

Analisando os experimentos de rotina que a pura Tris é capaz de realizar.

Para experimentos bioquímicos diários, a análise de Tris pura pode satisfazer plenamente os requisitos.Se é eletroforese por gel de agarose ou eletroforese por gel de poliacrilamida, o tampão TAE ou TBE preparado por Tris puro pode fornecer um ambiente de pH estável, e a clareza e mobilidade da banda são boas.Reservatório de gel de separação SDS-PAGE, tampão de gel concentrado e tampão de eletroforese todos dependem de Tris como o componente principal.A pureza do nível de pureza analítica é suficiente para assegurar a estabilidade da polimerização do gel e da separação das proteínas.O tampão de transferência de membrana no Western blot também é baseado em Tris e o nível de pureza analítica não afetará a eficiência da transferência de proteína do gel para a membrana.Em termos de purificação de proteínas, Tris HCl é o tampão de equilíbrio e de elução mais comumente utilizado quando se utilizam colunas de níquel ou outros meios de cromatografia de afinidade.As impurezas residuais no Tris puro não interferirão na ligação e na elução das proteínas marcadas com histidina.O Tris é adicionado como amortecedor auxiliar a alguns meios de cultura na cultura celular, e o grau analítico pode ser usado com segurança após esterilização a alta pressão.

Tris base em pó

Devem ser tomadas precauções quando se utilizam cenários com análise Tris pura.

Os experimentos relacionados com RNA são um cenário típico que requer cautela ao analisar Tris puro.e pode haver vestígios de atividade da RNase na solução tampãoSe o experimento envolver transcrição reversa, PCR quantitativa fluorescente em tempo real, ou construção de biblioteca de RNA, estas RNases podem levar à degradação do modelo de RNA,afetando a eficiência de amplificação e a precisão dos dadosPara tais experiências de alta sensibilidade, recomenda-se utilizar Tris sem nucleases ou soluções tratadas com DEPC e esterilização a alta pressão.Se as condições forem limitadas e só for possível utilizar Tris analítico puro, uma solução tampão pode ser preparada com água tratada com DEPC e depois submetida a esterilização a alta pressão.pode reduzir o risco de RNase até certo ponto..

Sistemas experimentais específicos inadequados para análise Tris pura

Alguns sistemas experimentais precisam evitar a própria Tris, que contém amino-grupos livres e pode reagir com agentes de ligação cruzada, como o glutaraldeído.O tampão Tris não é adequado para utilização com glutaraldeído em experimentos que exijam fixação celular ou de tecido.Da mesma forma, certos experimentos de rotulagem química ou modificação baseados em aminoácidos também devem evitar o uso de Tris e, em vez disso, usar agentes tamponadores não aminoácidos, como HEPES ou MOPS.Em termos de quantificação de proteínas, o método de Bradford é suscetível a interferências de Tris, como os grupos amino em Tris reagem com Coomassie Brilliant Blue corante para produzir cor de fundo, resultando em valores de medição mais elevados.Se o método de Bradford for necessário para quantificar a proteína no experimento, recomenda-se usar o método BCA ou o método Lowry, que são menos afetados pela interferência Tris.diluir adequadamente a amostra e reduzir a concentração de Tris antes de proceder à medição.

Atenção aos pormenores operacionais

Ao utilizar o Tris puro analítico, deve ser dada atenção à relação entre temperatura e pH. Se o experimento for realizado a 37 °C ou 4 °C,e o tampão é preparado e calibrado à temperatura ambiente, o valor real do pH à temperatura de funcionamento pode desviar-se das expectativas, o que pode afectar a actividade enzimática ou o estado celular.Recomenda-se considerar a temperatura durante a preparação e a calibração completa do pH à temperatura de funcionamento.Além disso, a análise Tris pura não é recomendada para sistemas de detecção que são altamente sensíveis aos íons metálicos, como alguns experimentos de sonda de íons metálicos baseados no apagamento por fluorescência,porque o fundo de iões de traços metálicos na análise Tris pura pode gerar sinais de interferência.

Conclusão

O Tris analítico puro é um reagente de laboratório altamente versátil que pode ser usado com confiança em experimentos de eletroforese, purificação e cultura de rotina.Amino reações, detecção sensível aos íons metálicos e certos métodos de quantificação de proteínas, a sua aplicabilidade deve ser avaliada ou medidas correspondentes devem ser tomadas.Compreender os limites de aplicabilidade da análise Tris pura não só pode evitar custos desnecessários de atualização do reagente, mas também evitar que os resultados experimentais sejam afetados por uma selecção incorreta.

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