Για ποιες πειραματικές χρήσεις μπορεί να χρησιμοποιηθεί η τρις αναλυτικής καθαρότητας και σε ποιες περιπτώσεις θα πρέπει να αποφεύγεται

Η αναλυτική ποιότητα Tris είναι μία από τις πιο συχνά χρησιμοποιούμενεςβιολογικά αποθέματα ασφαλείαςσε εργαστήρια, προσφέροντας υψηλή οικονομική απόδοση και ευρύ φάσμα εφαρμογών.καθώς μπορεί να παρουσιάσει κρυμμένους κινδύνους που οδηγούν σε αποτυχίες των πειραμάτων σε ορισμένα σενάριαΗ κατανόηση των κατάλληλων εφαρμογών και των περιορισμών του αναλυτικού βαθμού Tris μπορεί να βοηθήσει τους ερευνητές να αποφύγουν περιττά λάθη.

Αναλύοντας τα πειράματα ρουτίνας που η καθαρή Τρις είναι ικανή να εκτελέσει.

Για καθημερινά βιοχημικά πειράματα, η ανάλυση καθαρού Τρις μπορεί να ανταποκριθεί πλήρως στις απαιτήσεις.Είτε πρόκειται για ηλεκτροφόρηση με τζελ αγαρόζης είτε για ηλεκτροφόρηση με τζελ πολυακρυλαμίδηςΤο TAE ή το TBE buffer που παρασκευάζεται από καθαρό Tris μπορεί να παρέχει ένα σταθερό περιβάλλον pH και η σαφήνεια και η κινητικότητα της ζώνης είναι καλές.Κωφίδα ζελέ διαχωρισμού SDS-PAGE, συμπυκνωμένο ζελέ tampon και ηλεκτροφόρηση tampon όλα βασίζονται στην Τρις ως το βασικό συστατικό.Η καθαρότητα του επιπέδου αναλυτικής καθαρότητας είναι επαρκής για να εξασφαλιστεί η σταθερότητα της πολυμερισμού του τζελ και του διαχωρισμού των πρωτεϊνών.Το buffer μεταφοράς μεμβράνης στο Western blot βασίζεται επίσης στο Tris και το επίπεδο αναλυτικής καθαρότητας δεν θα επηρεάσει την αποτελεσματικότητα της μεταφοράς πρωτεΐνης από το τζελ στη μεμβράνη.Όσον αφορά τον καθαρισμό πρωτεϊνώνΤο Tris HCl είναι το πιο συχνά χρησιμοποιούμενο αδιάβροχο ισορροπίας και εξάλειψης όταν χρησιμοποιούνται στήλες νικελίου ή άλλα μέσα χρωματογραφίας συγγένειας.Οι ιχνοστοιχίες ρύπων στον καθαρό Τρις δεν θα παρεμβαίνουν στη σύνδεση και την εξάτμιση των πρωτεϊνών που έχουν ετικέτα υστιδίνης.Το Tris προστίθεται ως βοηθητικό απόσβεση σε ορισμένα μέσα καλλιέργειας στην κυτταρική καλλιέργεια και το αναλυτικό επίπεδο μπορεί να χρησιμοποιηθεί με ασφάλεια μετά την αποστείρωση υψηλής πίεσης.

Τρίσιμη βάση σε σκόνη

Πρέπει να χρησιμοποιείται προσοχή όταν χρησιμοποιούνται σενάρια με καθαρή ανάλυση Tris.

Τα πειράματα που σχετίζονται με το RNA είναι ένα τυπικό σενάριο που απαιτεί προσοχή κατά την ανάλυση του καθαρού Tris.και μπορεί να υπάρχουν ίχνη δραστηριότητας RNase που παραμένουν στο διάλυμα-απόθεμαΕάν το πείραμα περιλαμβάνει αντίστροφη μεταγραφή, ρεαλιστικό χρόνο φθοριστική ποσοτική PCR, ή κατασκευή βιβλιοθήκης RNA, αυτά τα ίχνη RNases μπορεί να οδηγήσει σε υποβάθμιση πρότυπο RNA,που επηρεάζουν την αποτελεσματικότητα της ενίσχυσης και την ακρίβεια των δεδομένωνΓια τέτοιου είδους πειράματα υψηλής ευαισθησίας, συνιστάται η χρήση του Tris χωρίς νουκλεάσες ή διαλύματα που έχουν υποστεί επεξεργασία με DEPC και αποστείρωση υψηλής πίεσης.Εάν οι συνθήκες είναι περιορισμένες και μπορεί να χρησιμοποιηθεί μόνο αναλυτικά καθαρό Tris, μπορεί να παρασκευαστεί ένα διάλυμα απόσβεσης χρησιμοποιώντας νερό που έχει υποβληθεί σε επεξεργασία με DEPC και στη συνέχεια να υποβληθεί σε αποστείρωση υψηλής πίεσης.μπορεί να μειώσει τον κίνδυνο της RNase σε κάποιο βαθμό.

Ειδικά πειραματικά συστήματα ακατάλληλα για καθαρή ανάλυση Tris

Μερικά πειραματικά συστήματα πρέπει να αποφεύγουν την ίδια την Τρις.Το Tris buffer δεν είναι κατάλληλο για χρήση με γλουταραλδεΰδη σε πειράματα που απαιτούν σταθεροποίηση κυττάρων ή ιστών.Ομοίως, ορισμένα πειράματα χημικής σήμανσης ή τροποποίησης με βάση τα αμινοειδή πρέπει επίσης να αποφεύγουν τη χρήση του Tris και να χρησιμοποιούν αντί αυτού μη αμινοειδή buffering agents όπως HEPES ή MOPS.Όσον αφορά τον ποσοτικό προσδιορισμό των πρωτεϊνών, η μέθοδος Μπράντφορντ είναι ευαίσθητη στις παρεμβολές από την Τρις, καθώς οι αμινοομάδες στην Τρις αντιδρούν με τη βαφή Coomassie Brilliant Blue για να παράγουν χρώμα φόντου, με αποτέλεσμα υψηλότερες τιμές μέτρησης.Εάν η μέθοδος Μπράντφορντ είναι απαραίτητη για τον ποσοτικό προσδιορισμό των πρωτεϊνών στο πείραμα, συνιστάται να χρησιμοποιηθεί η μέθοδος BCA ή η μέθοδος Lowry, οι οποίες επηρεάζονται λιγότερο από την παρέμβαση Tris.αραίνεται το δείγμα κατάλληλα και μειώνεται η συγκέντρωση Tris πριν προχωρήσει στη μέτρηση.

Προσοχή στις λειτουργικές λεπτομέρειες

Όταν χρησιμοποιείται αναλυτικό καθαρό Tris, πρέπει να δίνεται προσοχή στη σχέση μεταξύ θερμοκρασίας και pH. Εάν το πείραμα διεξάγεται σε θερμοκρασία 37 °C ή 4 °C,και το απόθεμα ασφαλείας παρασκευάζεται και βαθμολογείται σε θερμοκρασία δωματίου, η πραγματική τιμή pH στη θερμοκρασία λειτουργίας μπορεί να αποκλίνει από τις προσδοκίες, γεγονός που μπορεί να επηρεάσει τη δραστηριότητα των ενζύμων ή την κατάσταση των κυττάρων.Συνιστάται να λαμβάνεται υπόψη η θερμοκρασία κατά την παρασκευή και να γίνεται πλήρης βαθμονόμηση του pH στη θερμοκρασία λειτουργίας.Επιπλέον, η καθαρή ανάλυση Tris δεν συνιστάται για συστήματα ανίχνευσης τα οποία είναι ιδιαίτερα ευαίσθητα στα ιόντα μετάλλων, όπως ορισμένα πειράματα με ανιχνευτές ιόντων μετάλλων που βασίζονται στην εξασθένηση με φθορά,επειδή το φόντο ιόντων ιχνοστοιχείων μετάλλων στην καθαρή ανάλυση Tris μπορεί να παράγει σήματα παρεμβολής.

Συμπεράσματα

Ο αναλυτικός καθαρός Τρις είναι ένα πολύ ευπροσάρμοστο εργαστηριακό αντιδραστήριο που μπορεί να χρησιμοποιηθεί με βεβαιότητα σε συνηθισμένα πειράματα ηλεκτροφόρησης, καθαρισμού και καλλιέργειας.αμινολογικές αντιδράσεις, ευαίσθητη ανίχνευση ιόντων μετάλλων, και ορισμένες μεθόδους ποσοτικοποίησης πρωτεϊνών, πρέπει να αξιολογηθεί η εφαρμογή τους ή να ληφθούν αντίστοιχα μέτρα.Η κατανόηση των ορίων εφαρμογής της καθαρής ανάλυσης Tris μπορεί όχι μόνο να αποφύγει περιττά έξοδα αναβάθμισης αντιδραστηρίου, αλλά και να αποτρέψει την επίδραση των πειραματικών αποτελεσμάτων από εσφαλμένη επιλογή.

Συσκευασία προϊόντος

Ως κατασκευαστήςΤριυδροξυμεθυλαμινομεθάνιο, Desheng μπορεί να προμηθεύσει περισσότερο από 99% των πρώτων υλών σκόνες με σταθερή απόδοση και μικρές διαφορές παρτίδας, η οποία είναι ιδιαίτερα αναγνωρισμένη από την αγορά.Παρακαλώ κάντε κλικ στην ιστοσελίδα για να ρωτήσετε για λεπτομέρειες και αγορά!