Para qué experimentos se puede utilizar Tris de grado analítico y en qué escenarios debe evitarse

El grado analítico Tris es uno de los más utilizadosamortiguadores biológicosen laboratorios, ofreciendo una alta rentabilidad y una amplia gama de aplicaciones.ya que puede presentar riesgos ocultos que conducen a fallas experimentales en ciertos escenariosComprender las aplicaciones apropiadas y las limitaciones del grado analítico Tris puede ayudar a los investigadores a evitar errores innecesarios.

Analizando los experimentos de rutina que la pura Tris es capaz de realizar.

Para experimentos bioquímicos diarios, el análisis de Tris pura puede satisfacer plenamente los requisitos.Si se trata de electroforesis por gel de agarosa o electroforesis por gel de poliacrilamida, el tampón TAE o TBE preparado por Tris puro puede proporcionar un ambiente de pH estable, y la claridad y la movilidad de la banda son buenas.El buffer de gel de separación SDS-PAGE, el buffer de gel concentrado y el buffer de electroforesis dependen de Tris como el componente principal.La pureza del nivel de pureza analítica es suficiente para garantizar la estabilidad de la polimerización del gel y la separación de proteínas.El amortiguador de transferencia de membrana en Western blot también se basa en Tris, y el nivel de pureza analítica no afectará a la eficiencia de transferencia de proteínas del gel a la membrana.En términos de purificación de proteínasEl Tris HCl es el amortiguador de equilibrio y de elución más comúnmente utilizado cuando se utilizan columnas de níquel u otros medios de cromatografía de afinidad.Las pistas de impurezas en Tris puro no interferirán con la unión y la elución de las proteínas etiquetadas con histidina.El Tris se agrega como amortiguador auxiliar a algunos medios de cultivo en cultivo celular, y el grado analítico se puede utilizar con seguridad después de la esterilización a alta presión.

Polvo de base de Tris

Se debe tener precaución al utilizar escenarios con análisis Tris puro.

Los experimentos relacionados con el ARN son un escenario típico que requiere precaución al analizar Tris puro.y puede haber trazas de actividad de RNasa en la solución tampónSi el experimento involucra transcripción inversa, PCR cuantitativa fluorescente en tiempo real o construcción de bibliotecas de ARN, estas RNases pueden conducir a la degradación de la plantilla de ARN,afectando a la eficiencia de la amplificación y a la exactitud de los datosPara tales experimentos de alta sensibilidad, se recomienda utilizar Tris sin nucleasas o soluciones tratadas con DEPC y esterilización a alta presión.Si las condiciones son limitadas y sólo se puede utilizar Tris analítico puro, una solución tampón puede prepararse con agua tratada con DEPC y luego ser sometida a esterilización a alta presión.puede reducir el riesgo de RNase hasta cierto punto.

Sistemas experimentales específicos inadecuados para el análisis Tris puro

Algunos sistemas experimentales necesitan evitar a la propia Tris. Tris contiene grupos amino libres y puede reaccionar con agentes de enlace cruzado como el glutaraldehído.El tampón de Tris no es adecuado para su uso con glutaraldehído en experimentos que requieren fijación celular o de tejido.Del mismo modo, ciertos experimentos de etiquetado químico o modificación basados en aminoácidos también deben evitar el uso de Tris y en su lugar utilizar agentes tampones no aminoácidos como HEPES o MOPS.En términos de cuantificación de proteínas, el método de Bradford es susceptible a la interferencia de Tris, ya que los grupos amino en Tris reaccionan con el colorante Coomassie Brilliant Blue para producir el color de fondo, lo que resulta en valores de medición más altos.Si se necesita el método Bradford para cuantificar la proteína en el experimento, se recomienda utilizar el método BCA o el método Lowry, que se ven menos afectados por la interferencia de Tris.diluir adecuadamente la muestra y reducir la concentración de Tris antes de proceder a la medición.

Atención a los detalles operativos

Cuando se utilice Tris analítico puro, se debe prestar atención a la relación entre temperatura y pH. Si el experimento se realiza a 37 °C o 4 °C,y el amortiguador está preparado y calibrado a temperatura ambiente, el valor real del pH a la temperatura de funcionamiento puede desviarse de las expectativas, lo que puede afectar a la actividad enzimática o al estado celular.Se recomienda tener en cuenta la temperatura durante la preparación y la calibración completa del pH a la temperatura de trabajo.Además, el análisis Tris puro no se recomienda para los sistemas de detección que son muy sensibles a los iones metálicos, como algunos experimentos de sonda de iones metálicos basados en el apagado por fluorescencia,porque el fondo de iones metales en análisis Tris puro puede generar señales de interferencia.

Conclusión

El Tris analítico puro es un reactivo de laboratorio muy versátil que se puede usar con confianza en electrophoresis de rutina, purificación y experimentos de cultivo.reacciones amino, detección sensible de iones metálicos y ciertos métodos de cuantificación de proteínas, es necesario evaluar su aplicabilidad o adoptar medidas correspondientes.La comprensión de los límites de aplicabilidad del análisis Tris puro no sólo puede evitar costos innecesarios de actualización del reactivo, pero también evitar que los resultados experimentales se vean afectados por una selección incorrecta.

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