Für welche Experimente kann analytisches Tris verwendet werden und in welchen Szenarien sollte es vermieden werden

Produktname

Tris (hydroxymethyl) aminomethan

Chemische Weißes kristallines PulverTRIS-Puffer

P

Vorsicht ist geboten bei der Verwendung von Szenarien mit reiner Tris-AnalyseAussehenWeißes kristallines PulverCAS

Nummer

77-86-1Molekulare

Formel

Einige experimentelle Systeme müssen Tris selbst vermeiden. Tris enthält freie Aminogruppen und kann mit Vernetzungsmitteln wie Glutaraldehyd reagieren. Daher ist Tris-Puffer nicht für die Verwendung mit Glutaraldehyd in Experimenten geeignet, die eine Fixierung von Zellen oder Geweben erfordern. Ebenso sollten bestimmte aminbasierte chemische Markierungs- oder Modifikationsexperimente die Verwendung von Tris vermeiden und stattdessen nicht-aminbasierte Puffer wie HEPES oder MOPS verwenden. Bei der Proteinquantifizierung ist die Bradford-Methode anfällig für Störungen durch Tris, da die Aminogruppen in Tris mit dem Coomassie Brilliant Blue-Farbstoff reagieren und eine Hintergrundfarbe erzeugen, was zu höheren Messwerten führt. Wenn die Bradford-Methode zur Quantifizierung von Proteinen im Experiment benötigt wird, wird empfohlen, die BCA-Methode oder die Lowry-Methode zu verwenden, die weniger von Tris-Störungen betroffen sind. Alternativ kann die Probe entsprechend verdünnt und die Tris-Konzentration vor der Messung reduziert werden.500g/Flascheolekulargewicht121.135

S

Einige experimentelle Systeme müssen Tris selbst vermeiden. Tris enthält freie Aminogruppen und kann mit Vernetzungsmitteln wie Glutaraldehyd reagieren. Daher ist Tris-Puffer nicht für die Verwendung mit Glutaraldehyd in Experimenten geeignet, die eine Fixierung von Zellen oder Geweben erfordern. Ebenso sollten bestimmte aminbasierte chemische Markierungs- oder Modifikationsexperimente die Verwendung von Tris vermeiden und stattdessen nicht-aminbasierte Puffer wie HEPES oder MOPS verwenden. Bei der Proteinquantifizierung ist die Bradford-Methode anfällig für Störungen durch Tris, da die Aminogruppen in Tris mit dem Coomassie Brilliant Blue-Farbstoff reagieren und eine Hintergrundfarbe erzeugen, was zu höheren Messwerten führt. Wenn die Bradford-Methode zur Quantifizierung von Proteinen im Experiment benötigt wird, wird empfohlen, die BCA-Methode oder die Lowry-Methode zu verwenden, die weniger von Tris-Störungen betroffen sind. Alternativ kann die Probe entsprechend verdünnt und die Tris-Konzentration vor der Messung reduziert werden.500g/FlascheHerstellerHubei Xindesheng

Analyse der Routineexperimente, die reines Tris durchführen kann

Für tägliche biochemische Experimente kann die Analyse von reinem Tris die Anforderungen vollständig erfüllen. Die Nukleinsäureelektrophorese ist eine der am häufigsten verwendeten Anwendungen. Ob Agarosegel-Elektrophorese oder Polyacrylamidgel-Elektrophorese, der mit reinem Tris hergestellte TAE- oder TBE-Puffer kann eine stabile pH-Umgebung bieten, und die Bandklarheit und Mobilität sind gut. Die Proteinelektrophorese ist ebenfalls kein Problem. SDS-PAGE-Trenngel-Puffer, konzentrierter Gel-Puffer und Elektrophoresepuffer basieren alle auf Tris als Kernkomponente. Die Reinheit des analytischen Reinheitsgrades reicht aus, um die Stabilität der Gelpolymerisation und der Proteinseparation zu gewährleisten. Der Membrantransferpuffer in Western Blots basiert ebenfalls auf Tris, und der analytische Reinheitsgrad beeinträchtigt nicht die Effizienz des Proteintransfers vom Gel auf die Membran. Bei der Proteinreinigung ist Tris HCl der am häufigsten verwendete Gleichgewichts- und Elutionspuffer bei der Verwendung von Nickel-Säulen oder anderen Affinitätschromatographiemedien. Spurenverunreinigungen in reinem Tris stören die Bindung und Elution von Histidin-markierten Proteinen nicht. Tris wird als Hilfspuffer zu einigen Kulturmedien in der Zellkultur hinzugefügt, und die analytische Qualität kann nach Hochdrucksterilisation sicher verwendet werden.Tris-BasenpulverVorsicht ist geboten bei der Verwendung von Szenarien mit reiner Tris-AnalyseRNA-bezogene Experimente sind ein typisches Szenario, das Vorsicht bei der Analyse von reinem Tris erfordert. Die analytische Qualität entfernt während des Produktionsprozesses keine Nukleasen, und es kann eine Spurenmenge an RNase-Aktivität im Puffer vorhanden sein. Wenn das Experiment eine Umkehrtranskription, eine Echtzeit-Fluoreszenz-quantitative PCR oder den Aufbau einer RNA-Bibliothek beinhaltet, können diese Spuren-RNasen zu einer Degradation der RNA-Matrize führen und die Amplifikationseffizienz und die Daten genauigkeit beeinträchtigen. Für solche hochempfindlichen Experimente wird empfohlen, Tris ohne Nukleasen oder mit DEPC behandelte und hochdrucksterilisierte Lösungen zu verwenden. Wenn die Bedingungen begrenzt sind und nur analytisch reines Tris verwendet werden kann, kann eine Pufferlösung mit DEPC-behandeltem Wasser hergestellt und dann hochdrucksterilisiert werden. Obwohl dies möglicherweise nicht vollständig professionellen Standards entspricht, kann es das Risiko von RNase bis zu einem gewissen Grad reduzieren.

Spezifische experimentelle Systeme, die für die reine Tris-Analyse ungeeignet sind

Einige experimentelle Systeme müssen Tris selbst vermeiden. Tris enthält freie Aminogruppen und kann mit Vernetzungsmitteln wie Glutaraldehyd reagieren. Daher ist Tris-Puffer nicht für die Verwendung mit Glutaraldehyd in Experimenten geeignet, die eine Fixierung von Zellen oder Geweben erfordern. Ebenso sollten bestimmte aminbasierte chemische Markierungs- oder Modifikationsexperimente die Verwendung von Tris vermeiden und stattdessen nicht-aminbasierte Puffer wie HEPES oder MOPS verwenden. Bei der Proteinquantifizierung ist die Bradford-Methode anfällig für Störungen durch Tris, da die Aminogruppen in Tris mit dem Coomassie Brilliant Blue-Farbstoff reagieren und eine Hintergrundfarbe erzeugen, was zu höheren Messwerten führt. Wenn die Bradford-Methode zur Quantifizierung von Proteinen im Experiment benötigt wird, wird empfohlen, die BCA-Methode oder die Lowry-Methode zu verwenden, die weniger von Tris-Störungen betroffen sind. Alternativ kann die Probe entsprechend verdünnt und die Tris-Konzentration vor der Messung reduziert werden.Aufmerksamkeit auf operative Details

Bei der Verwendung von analytisch reinem Tris ist die Beziehung zwischen Temperatur und pH-Wert zu beachten. Wenn das Experiment bei 37 °C oder 4 °C durchgeführt wird und der Puffer bei Raumtemperatur hergestellt und kalibriert wird, kann der tatsächliche pH-Wert bei der Betriebstemperatur von den Erwartungen abweichen, was die Enzymaktivität oder den Zellzustand beeinträchtigen kann. Es wird empfohlen, die Temperatur während der Zubereitung zu berücksichtigen und die pH-Kalibrierung bei der Arbeitstemperatur abzuschließen. Darüber hinaus wird die reine Tris-Analyse für Detektionssysteme, die sehr empfindlich auf Metallionen reagieren, wie z. B. einige auf Fluoreszenzlöschung basierende Metallionensondenexperimente, nicht empfohlen, da der Hintergrund von Spurenmetallionen in der reinen Tris-Analyse Störsignale erzeugen kann.