Per quali esperimenti può essere utilizzato il Tris di grado analitico e in quali scenari dovrebbe essere evitato

Il grado analitico Tris è uno dei più utilizzatitamponi biologiciin laboratori, offrendo un'elevata redditività e una vasta gamma di applicazioni.in quanto può comportare rischi nascosti che possono portare a fallimenti sperimentali in determinati scenariLa comprensione delle applicazioni appropriate e dei limiti del grado analitico Tris può aiutare i ricercatori a evitare errori inutili.

Analizzando gli esperimenti di routine che la pura Tris è in grado di eseguire.

Per gli esperimenti biochimici quotidiani, l'analisi di Tris pura può soddisfare pienamente i requisiti.Se si tratta di elettroforesi in gel di agarosio o di elettroforesi in gel di poliacrilammide, il tampone TAE o TBE preparato da Tris puro può fornire un ambiente pH stabile e la chiarezza e la mobilità della banda sono buone.Buffer di gel di separazione SDS-PAGE, tampone a gel concentrato e tampone per elettroforesi tutti si basano su Tris come componente principale.La purezza del livello di purezza analitica è sufficiente a garantire la stabilità della polimerizzazione del gel e della separazione delle proteine.Il tampone di trasferimento della membrana nel Western blot è anch'esso basato su Tris e il livello di purezza analitica non influenzerà l'efficienza del trasferimento della proteina dal gel alla membrana.In termini di depurazione delle proteine, Tris HCl è il tampone di equilibrio ed eluzione più comunemente utilizzato quando si utilizzano colonne di nichel o altri mezzi di cromatografia di affinità.Le tracce di impurità nel Tris puro non interferiranno con il legame e l'eluzione delle proteine etichettate con istidina.Il Tris viene aggiunto come tampone ausiliario ad alcuni mezzi di coltura nella coltura cellulare e il grado analitico può essere usato in sicurezza dopo la sterilizzazione ad alta pressione.

Tris base in polvere

Occorre prestare attenzione quando si utilizzano scenari con analisi Tris pura

Gli esperimenti relativi all'RNA sono uno scenario tipico che richiede cautela quando si analizza il Tris puro.e possono rimanere tracce di attività RNasica nella soluzione tamponeSe l'esperimento prevede trascrizione inversa, PCR quantitativa fluorescente in tempo reale o costruzione di librerie di RNA, queste tracce di RNase possono portare alla degradazione del modello di RNA,che influenzano l'efficienza di amplificazione e l'accuratezza dei datiPer tali esperimenti ad alta sensibilità, si raccomanda di utilizzare Tris senza nucleasi o soluzioni trattate con DEPC e sterilizzazione ad alta pressione.Se le condizioni sono limitate e può essere utilizzato solo Tris analitico puro, una soluzione tampone può essere preparata utilizzando acqua trattata con DEPC e successivamente sottoposta a sterilizzazione ad alta pressione.può ridurre il rischio di RNasi in una certa misura.

Sistemi sperimentali specifici non adatti all'analisi Tris pura

Alcuni sistemi sperimentali devono evitare la Tris stessa, la Tris contiene amino gruppi liberi e può reagire con agenti di incrocio come la glutaraldeide.Il tampone Tris non è adatto per l'uso con glutaraldeide in esperimenti che richiedono la fissazione cellulare o tissutale.Allo stesso modo, alcuni esperimenti di etichettatura o modificazione chimica basati su aminoacidi dovrebbero anche evitare l'uso di Tris e utilizzare invece agenti tamponanti non aminoacidi come HEPES o MOPS.In termini di quantificazione delle proteine, il metodo di Bradford è suscettibile di interferenze da parte di Tris, poiché gli amino gruppi in Tris reagiscono con il colorante blu brillante di Coomassie per produrre il colore di sfondo, con conseguenti valori di misurazione più elevati.Se è necessario utilizzare il metodo Bradford per quantificare le proteine nell'esperimento, si raccomanda di utilizzare il metodo BCA o il metodo Lowry, che sono meno influenzati dall'interferenza Tris.diluire adeguatamente il campione e ridurre la concentrazione di Tris prima di procedere alla misurazione.

Attenzione ai dettagli operativi

Quando si utilizza Tris analitico puro, si deve prestare attenzione alla relazione tra temperatura e pH. Se l'esperimento viene condotto a 37 °C o 4 °C,e il tampone è preparato e calibrato a temperatura ambiente, il valore effettivo del pH alla temperatura di funzionamento può deviare dalle aspettative, il che può influenzare l'attività enzimatica o lo stato cellulare.Si raccomanda di tenere conto della temperatura durante la preparazione e di effettuare una calibrazione completa del pH alla temperatura di lavoro.Inoltre, l'analisi Tris pura non è raccomandata per i sistemi di rilevamento altamente sensibili agli ioni metallici, come ad esempio alcuni esperimenti con sonde per ioni metallici basati sull'estinguimento a fluorescenza.perché lo sfondo di ioni metallici in analisi Tris pura può generare segnali di interferenza.

Conclusioni

Il Tris analitico puro è un reagente di laboratorio altamente versatile che può essere usato con sicurezza in esperimenti di elettroforesi, purificazione e coltura di routine.Amino-reazioni, rilevamento sensibile agli ioni metallici e alcuni metodi di quantificazione delle proteine, la loro applicabilità deve essere valutata o devono essere adottate misure corrispondenti.La comprensione dei limiti di applicabilità dell'analisi Tris pura può non solo evitare inutili costi di aggiornamento dei reagenti, ma impedisce anche che i risultati sperimentali siano influenzati da una selezione errata.

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