分析グレードのTrisはどんな実験に使用され,どのシナリオでは避けるべきか

分析グレードTrisは最も一般的に使用される1つです生物的なバッファ実験室では,高いコスト効率と幅広いアプリケーションを提供しています.しかし,すべての実験は分析グレードTrisに適していません.あるシナリオでは実験の失敗につながる隠されたリスクがあるため解析グレードTrisの適切な応用と限界を理解することで,研究者は不必要な間違いを避けるのに役立ちます.

純粋なトリスが実行できる ルーチン実験を分析する

日常の生化学実験では 純粋なトリスを分析することで 完全に対応できます 核酸電泳は 最も頻繁に使われるシーンの一つですアガロースゲル電解かポリアクリラミドゲル電解か純粋Trisで作られたTAEまたはTBEバッファは,安定したpH環境を提供し,帯の透明性と移動性が良好です.タンパク質電解も問題ではありません.SDS-PAGE分離ゲルバッファ凝縮ゲルバッファと電泳バッファは全て トリスを核心構成要素として利用しています分析純度レベルの純度は,ゲルポリメリゼーションとタンパク質分離の安定性を確保するのに十分である.ウェスタン・ブロットの膜移転バッファもTrisをベースにしており,分析純度レベルはゲルから膜へのタンパク質移転の効率に影響しません.タンパク質浄化について, Tris HClは,ニッケル柱または他の親和性染色体媒体を使用する際に最も一般的に使用される均衡および溶解バッファです.純粋なTrisの微量不純物はヒスティジンタグされたタンパク質の結合と溶解を妨げない.トリスは細胞培養におけるいくつかの培養媒体に補助バッファとして加えられ,分析グレードは高圧滅菌後に安全に使用できます.

トリス 塩基 粉

純粋なTris分析のシナリオを使用する際には注意が必要です

RNA関連実験は,純粋なTrisを分析する際に注意が必要とする典型的なシナリオです. 分析グレードは,生産プロセス中に特にヌクレアースを除去しません.緩衝溶液に RNase 活性が残っている可能性もあります実験に逆転転写,リアルタイム・フルオレッセンスの定量PCR,またはRNAライブラリ構築が含まれている場合,これらのRNaseの痕跡はRNAテンプレートの退化につながる可能性があります.増幅効率とデータ正確性に影響を与えるこのような高感度実験では,DEPCと高圧滅菌処理された核酸や溶液なしでTrisを使用することが推奨されます.条件が限られていて,純粋な分析用Trisのみを使用できる場合DEPC処理水を用いて緩衝溶液を調製し,高圧消毒にかけることができます.RNase のリスクを一定程度減らすことができます..

純粋なTris分析に適さない特殊実験システム

実験システムではTris自体も避けなければなりません Trisには自由アミノグループがあり グルタアルデヒドなどの交叉結合剤と反応できますトリスバッファは,細胞または組織固定を必要とする実験でグルタアルデヒドと使用するには適していません.同様に,特定のアミノ基化学ラベル付けまたは改変実験では,Trisの使用を避け,代わりにHEPESやMOPSなどの非アミノバッファリング剤を使用すべきである.タンパク質の定量化について,ブラッドフォード方法はTrisからの干渉に敏感で,TrisのアミノグループはCoomassie Brilliant Blue染料と反応して背景色を生成し,結果として測定値が高くなります.実験でタンパク質を定量化するためにブラッドフォード方法が必要な場合は,Tris干渉の影響が少ないBCA方法またはローリー方法を使用することが推奨されます.測定を行う前にサンプルを適切に稀釋し,Tris濃度を減らす..

詳細に注意

分析用純粋Trisを使用する際には,温度とpHの関係に注意を払う必要があります.実験が37°Cまたは4°Cで実施される場合,そしてバッファは室温で準備され,校正されます動作温度での実際のpH値は期待値に偏り,酵素活性や細胞状態に影響を与える可能性があります.調製中に温度を考慮し,作業温度でpHを完全に校正することを推奨しますさらに,純粋なTris分析は,フラウセンス消化に基づくいくつかの金属イオン探査実験など,金属イオンに非常に敏感な検出システムでは推奨されません.純粋なTris分析における金属イオンの背景は 干渉信号を生む可能性があるからです.

結論

分析的な純粋Trisは 非常に汎用的な実験用反応体で 普通の電球分解,浄化,培養実験で 確実に使用できますアミノ反応タンパク質の定量化方法,それらの適用性を評価するか,それに対応する措置を講じなければならない.純粋なTris分析の適用限界を理解することで,不必要な反応剤アップグレードコストを回避できるだけでなく,誤った選択によって実験結果に影響を及ぼさないようにする.

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