検出システムにおける HEPES 7365-45-9 互換性干渉を分析する

HEPESは,一般的に使用される生物学的バッファとして,軽度の化学活性があるが,特定の分析試験の結果に予期せぬ干渉を引き起こす可能性がある.この種の干渉は 強力な隠蔽がありますデータの偏見の源になる可能性があります.HEPESバッファ実験手順を合理的に設計し,分析精度を向上させるのに役立ちます.

タンパク質量化方法の干渉特性

BCAとローリー法では,HEPES分子内の硫酸と三次アミン群は,銅離子と溶解複合体を形成し,反応システムで競争的に銅離子を消費することができる.色信号が減少するHEPES が従来の濃度範囲の上限に達すると,測定値が観測可能なより低い結果をもたらす可能性があります.バッファーの濃度と相関しています対照的に,ブラッドフォード方法は,Coomassie Brilliant Blueがタンパク質に結合することを基礎とし,HEPESの干渉の影響は少ない.しかし,HEPESの濃度が高ければ,溶液の電解定数を変化させる可能性があります.したがって,タンパク質の定量化を行うとき,標準曲線を描くために,同じバッファ背景を持つ標準サンプルを使用することが推奨されます.試料の塩分を前もって淡化するために.

HEPESバッファ

酵素活性決定と結合反応への影響

HEPES は,いくつかの酸化解脱酶と移転酶の活性を調節する作用を有する.研究によると,HEPES は,過酸化酶催化反応に参加することができる.酵素を基に化学発光または色測定の最終点の決定に影響を与える結合酵素測定では,反応の第一段階で過酸化水素または自由基間物質が生成される場合,HEPESは自由基のスキャベッチャーまたはドナーとして作用する.反応速度を変化させ,吸収度値が実際の値から逸脱するさらに,HEPESは短紫外線帯で弱い吸収性を有します.この帯で基板の消費量や製品生成をモニタリングする必要のある運動実験では,バッファーの空白を減算するか,紫外線吸収が弱い代替剤を使用する必要があります..

発光と化学発光検出に対する潜在的な干渉

発光分析は溶液組成に敏感で,HEPESは,特に紫外線発光領域では,いくつかの興奮波長で背景発光を生成することができる.濃度が伝統的なバッファリング剤よりも低いものの低濃度フラウレッセンスの探知を妨げる可能性があります.時間解消式フラウレッセンスの実験やフラウレッセンスの偏振実験では,HEPES は,溶液の屈折率と粘度を変えることができる.化学発光検出では,HEPESは軽量または移行金属イオンの存在下でゆっくりと分解して過酸化水素を生成することができる.この副産物は,ルミノールまたはアクリジンエステルに基づく発光システムを強化または抑制する.光回避技術を使用し,適切な量の金属ケラ化剤を加えることで,そのような干渉を軽減するのに役立ちます.

干渉と実験的対策の特定

HEPES が特定の検出システムに干渉するかどうかを判断するには,二つの制御戦略を採用することができる.HEPES を含むバッファに標的物質標準の既知の濃度を加える回復率が許容可能な偏差範囲に収まるかどうかを比較する.2つ目の方法は,緩衝剤なしで生理塩液でサンプルを稀释し,再試験することによって,稀释または移動の検証を行うことです.試験結果に非線形変化がある場合,それはバッファエージェントによる干渉を示します. 影響が確認された実験では,HEPES濃度をバッファリング要件を満たす最低レベルまで低下させることを検討することができる.,または同じpH範囲内での干渉が少ないPIPESまたはEPPSに置き換える.HEPESが使用されなければならない場合,決定前に透析またはゲル過濾によって除去することができます.しかし,この操作によってサンプル濃度が変化することが注意すべきです..

総合的な勧告

HEPESの互換性問題は普遍的ではありませんが,特定の方法の観測可能なデータオフセットを引き起こす可能性があります.実験者は,新しい方法を確立する際に,検出エンドポイントに対するバッファタイプと濃度の影響を体系的に評価すべきである.異なる文献における干渉レベルの記述は,条件の違いのためにしばしば異なります.したがって,実験の各バッチに内部品質管理サンプルを付与することが推奨されます.合理的な制御設計と必要な事前処理により,HEPESの干渉効果は効果的に制御できます.分析されたデータの真性と再現性を保証する.

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