Analyseer compatibiliteitsinterferentie HEPES 7365-45-9 in het detectiesysteem

HEPES, als algemeen gebruikte biologische buffer, kan, hoewel het een lichte chemische activiteit heeft, onverwachte interferentie met de resultaten van specifieke analytische tests veroorzaken.Dit soort interferentie heeft een sterke verberging.Het gedrag van de data is niet volledig te begrijpen, maar het kan een bron worden van data bias.HEPES-bufferIn verschillende detectiesystemen kan worden geholpen om experimentele procedures rationeel te ontwerpen en de analytische nauwkeurigheid te verbeteren.

Interferentiekarakteristieken van eiwitkwantificatiemethoden

Bij de BCA- en Lowry-methoden kunnen de sulfonsuur- en tertiaire amingroepen in HEPES-moleculen oplosbare complexen vormen met koper ionen, die competitief koper ionen verbruiken in het reactiesysteem,wat resulteert in een afname van het kleursignaalWanneer HEPES zich op de bovengrens van het conventionele concentratiebereik bevindt, kunnen de gemeten waarden waarneembare lagere resultaten opleveren.en de mate van afwijking is enigszins gecorreleerd met de bufferconcentratieDe Bradford-methode daarentegen is gebaseerd op de binding van Coomassie Brilliant Blue aan eiwitten en wordt minder beïnvloed door HEPES-interferentie.maar hogere concentraties HEPES kunnen nog steeds de dielectrische constante van de oplossing veranderenDaarom wordt bij de kwantificatie van eiwitten aanbevolen een standaardmonster met dezelfde bufferachtergrond als het monster te gebruiken om een standaardcurve te tekenen.of om het monster vooraf te ontzilten.

HEPES-buffer

De invloed op de bepaling van de enzymactiviteit en de koppelingsreactie

Onderzoek heeft aangetoond dat HEPES kan deelnemen aan peroxidase-gekatalyseerde reacties,tot op zekere hoogte remmen van hun katalytische efficiëntie en beïnvloeden van de bepaling van chemiluminescentie of colorimetrische eindpunten op basis van het enzymIn gekoppelde enzymtests kan HEPES, indien in de eerste reactiestap waterstofperoxide of vrije radicalen tussenprodukten worden geproduceerd, optreden als vrijradicalen afzuiger of donor.de reactiesnelheid veranderen en de absorptiewaarde van de werkelijke waarde laten afwijkenVoor kinetische experimenten die de controle van het substraatverbruik of de productie van producten in deze band vereisen, is het nodig om de HEPES-inhoud te analyseren.Buffer blank moet worden afgetrokken of een vervanger met een zwakkere ultraviolette absorptie moet worden gebruikt.

Potentiële interferentie met fluorescentie- en chemiluminescentiedetectie

Fluorescentie-analyse is gevoelig voor de samenstelling van de oplossing, en HEPES kan achtergrondfluorescentie produceren bij sommige excitatiegolflengten, vooral in het ultraviolette excitatiegebied.Hoewel de intensiteit lager is dan bij sommige traditionele buffersVoor experimenten met een tijdsresolutie van fluorescentie of fluorescentiepolarisatie kan het nog steeds interfereren met de detectie van fluorescerende sondes met een lage overvloed.HEPES kan de brekingsindex en de viscositeit van de oplossing veranderenBij chemiluminescentie-detectie kan HEPES langzaam ontbinden tot waterstofperoxide in aanwezigheid van lichte of overgangsmetalen.Dit bijproduct versterkt of remt luminescerende systemen op basis van luminol- of acridineestersMet behulp van lichtvermijdende technieken en het toevoegen van een passende hoeveelheid metaalchelatingsmiddel kunnen dergelijke interferenties worden verlicht.

Identificatie van interferentie en experimentele tegenmaatregelen

Om vast te stellen of HEPES een bepaald detectiesysteem beïnvloedt, kunnen twee controlestrategieën worden toegepast.het toevoegen van een bekende concentratie van de doelstofstandaard aan een buffer die HEPES bevat, waarbij wordt vergeleken of de terugvordering binnen een aanvaardbaar afwijkingsbereik valt.De tweede methode is het valideren van verdunning of verplaatsing door het monster te verdunnen met fysiologische zoutoplossing zonder buffermiddelen en opnieuw te testen.Als er een niet-lineaire verandering in de resultaten is, geeft dit interferentie van bufferacties aan.het kan worden overwogen de HEPES-concentratie te verlagen tot het laagste niveau dat voldoet aan de bufferingseisen, of het vervangen door PIPES of EPPS met minder interferentie binnen hetzelfde pH-bereik. Indien HEPES moet worden gebruikt, kan het vóór de bepaling worden verwijderd door dialyse of gelfiltratie,maar er moet op worden gewezen dat deze bewerking de concentratie van het monster kan veranderen.

Alomvattende aanbevelingen

Het compatibiliteitsprobleem van HEPES is niet universeel, maar kan voor specifieke methoden leiden tot waarneembare gegevensverschuiving.Bij het ontwikkelen van nieuwe methoden moeten proefpersonen systematisch het effect van buffertype en concentratie op het detectie-endpoint evalueren.De beschrijving van het interferentieniveau in de verschillende literatuur varieert vaak vanwege verschillen in omstandigheden.Daarom is het raadzaam om aan elke partij proeven interne kwaliteitscontrolemonsters toe te voegen.Door een redelijk besturingsplan en de noodzakelijke voorbehandeling kan het interferentie-effect van HEPES effectief worden beheerd.het waarborgen van de authenticiteit en reproduceerbaarheid van de geanalyseerde gegevens.

Verpakking van het product

Als fabrikant van HEPES buffers,DeshengDe Commissie heeft de Commissie verzocht om een verslag uit te brengen over de maatregelen die zij heeft genomen om de kwaliteit van de producten te verbeteren.,Desheng heeft unanieme lof van klanten ontvangen. Als u relevante intenties heeft, klik dan op de website om informatie te vragen en te kopen!