Анализировать помехи совместимости HEPES 7365-45-9 в системе обнаружения

HEPES, как обычно используемый биологический буфер, хотя и имеет легкую химическую активность, может вызвать неожиданные помехи результатам конкретных аналитических тестов.Такой вид вмешательства имеет сильное сокрытие, но это может стать источником предвзятости данных.Буфер HEPESв различных системах обнаружения может помочь рационально разработать экспериментальные процедуры и улучшить точность анализа.

Характеристики интерференции методов количественного определения белка

В методах BCA и Лоури сульфоновая кислота и третичные аминовые группы в молекулах HEPES могут образовывать растворимые комплексы с ионами меди, конкурентно потребляя ионы меди в реакционной системе,что приводит к снижению цветового сигналаКогда HEPES находится на верхней границе обычного диапазона концентраций, измеренные значения могут давать более низкие результаты.и степень отклонения несколько коррелирует с концентрацией буфераВ отличие от этого, метод Брэдфорда основан на связывании Coomassie Brilliant Blue с белками и менее подвержен воздействию HEPES.но более высокие концентрации HEPES все равно могут изменять диэлектрическую постоянную раствораПоэтому при проведении количественного определения белка рекомендуется использовать стандартную выборку с тем же буферным фоном, что и выборка, чтобы нарисовать стандартную кривую.или для предварительной опреснения образца.

Буфер HEPES

Влияние на определение активности ферментов и реакцию сцепления

Исследования показали, что HEPES может участвовать в реакциях, катализируемых пероксидазой,в некоторой степени ингибируют их каталитическую эффективность и влияют на определение химиолюминесценции или колориметрических конечных показателей на основе ферментаПри анализе соединенных ферментов, если на первом этапе реакции образуется перекись водорода или промежуточные соединения свободных радикалов, HEPES может выступать в качестве очищающего или донора свободных радикалов.изменение скорости реакции и отклонение показания по абсорбанции от истинного значенияКроме того, HEPES имеет слабую абсорбцию в коротком ультрафиолетовом диапазоне.следует убрать пустоту буфера или использовать заменитель с более слабой ультрафиолетовой абсорбцией.

Потенциальные помехи для обнаружения флуоресценции и химиолюминесценции

Анализ флуоресценции чувствителен к составу раствора, и HEPES может производить флуоресценцию фона на некоторых волн возбуждения, особенно в области ультрафиолетового возбуждения.Хотя интенсивность ниже, чем у некоторых традиционных буферных агентовДля экспериментов с флуоресценцией с временным разрешением или флуоресцентной поляризациейHEPES может изменять показатель преломления и вязкость раствораПри обнаружении химиолюминесценцией HEPES может медленно распадаться, чтобы произвести перекись водорода в присутствии легких ионов или переходных металлов.Этот побочный продукт усиливает или подавляет люминесцентные системы на основе люминола или акридин-эстеровИспользование методов избегания света и добавление соответствующего количества хелатирующего агента может помочь облегчить такие помехи.

Определение воздействия и экспериментальные контрмеры

Для определения того, влияет ли HEPES на определенную систему обнаружения, можно использовать две стратегии контроля.добавление известной концентрации стандарта целевого вещества в буфер, содержащий HEPES, и сравнивать, находится ли коэффициент восстановления в пределах допустимого диапазона отклонений.Второй метод заключается в проведении валидации разведения или смещения путем разведения образца физиологическим соляным раствором без буферирующих средств и повторного тестирования.При наличии нелинейного изменения результатов это указывает на помехи от буферирующих агентов.можно рассмотреть возможность снижения концентрации HEPES до самого низкого уровня, соответствующего требованиям буферизации.Если HEPES необходимо использовать, он может быть удален диализом или гелевой фильтрацией до определения,но следует отметить, что эта операция может изменить концентрацию образца.

Всеобъемлющие рекомендации

Проблема совместимости HEPES не является универсальной, но она может привести к замечательному смещению данных для конкретных методов.При разработке новых методов экспериментаторы должны систематически оценивать влияние типа буфера и концентрации на конечную точку обнаружения.Описание уровня помех в различной литературе часто варьируется из-за различий в условиях.Поэтому целесообразно прикреплять внутренние образцы контроля качества к каждой партии экспериментов.При разумной конструкции контроля и необходимой предварительной обработке эффективно контролировать эффект интерференции HEPES.тем самым обеспечивая подлинность и воспроизводимость анализируемых данных.

Опаковка продукта

Как производитель буфера HEPES,Дешенгтолько после того, как упаковка и качество соответствуют стандартам, они могут быть проданы с завода.,Если у вас есть какие-либо соответствующие намерения, пожалуйста, нажмите на веб-сайт, чтобы узнать о деталях и покупке!