Analisar a interferência de compatibilidade HEPES 7365-45-9 no sistema de detecção

O HEPES, como amortecedor biológico comumente utilizado, embora tenha uma atividade química ligeira, pode causar interferências inesperadas nos resultados de testes analíticos específicos.Este tipo de interferência tem uma forte ocultação, mas pode tornar-se uma fonte de viés de dados.Reservatório HEPESA utilização de sistemas de detecção diferentes pode ajudar a conceber procedimentos experimentais de forma racional e a melhorar a precisão analítica.

Características de interferência dos métodos de quantificação de proteínas

Nos métodos BCA e Lowry, o ácido sulfónico e os grupos aminados terciários nas moléculas HEPES podem formar complexos solúveis com íons de cobre, consumindo competitivamente íons de cobre no sistema de reação,resultando numa diminuição do sinal de corQuando o HEPES se encontra no limite superior da gama de concentrações convencionais, os valores medidos podem produzir resultados observáveis mais baixos,e o grau de desvio está um pouco correlacionado com a concentração do tampãoEm contrapartida, o método de Bradford baseia-se na ligação do azul brilhante de Coomassie às proteínas e é menos afectado pela interferência do HEPES.mas concentrações mais elevadas de HEPES podem ainda alterar a constante dielétrica da solução, causando pequenas flutuações. Por conseguinte, ao efectuar a quantificação das proteínas, recomenda-se utilizar uma amostra padrão com o mesmo fundo tampão da amostra para desenhar uma curva padrão,ou para pré-desalinizar a amostra.

Reservatório HEPES

A influência na determinação da actividade enzimática e na reacção de acoplamento

O HEPES tem um efeito regulador sobre a actividade de algumas oxidoreductases e transferases.Inibindo em certa medida a sua eficiência catalítica e afectando a determinação da quimioluminescência ou dos parâmetros colorimétricos com base na enzima- nos ensaios de enzimas acopladas, se no primeiro passo da reacção forem produzidos peróxido de hidrogénio ou intermediários de radicais livres, o HEPES pode actuar como limpador ou doador de radicais livres,alterando a taxa de reação e fazendo com que a leitura da absorvência se desvie do valor realAlém disso, o HEPES tem uma fraca absorção na faixa ultravioleta curta.deve ser deduzido o buffer em branco ou deve ser utilizado um substituto com absorção ultravioleta mais fraca.

Interferências potenciais na detecção da fluorescência e da quimioluminescência

A análise de fluorescência é sensível à composição da solução, e o HEPES pode produzir fluorescência de fundo em alguns comprimentos de onda de excitação, especialmente na região de excitação ultravioleta.Embora a intensidade seja inferior a alguns agentes tampões tradicionaisPara os experimentos de fluorescência com resolução temporal ou polarização de fluorescência, o método de detecção é o seguinte:O HEPES pode alterar o índice de refração e a viscosidade da soluçãoNa detecção por quimioluminescência, o HEPES pode se decompor lentamente para produzir peróxido de hidrogênio na presença de iões de luz ou metais de transição.Este subproduto aumenta ou inibe os sistemas luminescentes baseados em ésteres de luminol ou acridinaO uso de técnicas de evitação da luz e a adição de uma quantidade adequada de agente quelante de metais podem ajudar a aliviar essa interferência.

Identificação de interferências e contramedidas experimentais

Para determinar se o HEPES interfere num sistema de detecção específico, podem ser adoptadas duas estratégias de controlo.adição de uma concentração conhecida do padrão de substância-alvo a um tampão que contenha HEPES, e comparando se a taxa de recuperação está dentro de um intervalo de desvio aceitável.O segundo método consiste em validar a diluição ou o deslocamento diluindo a amostra com solução fisiológica salina sem agentes tamponadores e reanalisando-a.Se houver uma alteração não linear nos resultados, indica interferência de agentes tampão.Pode ser considerado reduzir a concentração de HEPES para o nível mais baixo que satisfaça os requisitos de amortecimentoSe for necessário utilizar HEPES, pode ser removido por diálise ou filtragem por gel antes da determinação,mas deve notar-se que esta operação pode alterar a concentração da amostra.

Recomendações abrangentes

A questão da compatibilidade do HEPES não é universal, mas pode resultar em desvio de dados observáveis para métodos específicos.Os experimentadores devem avaliar sistematicamente o impacto do tipo de amortecimento e da concentração no ponto final de detecção ao estabelecer novos métodos.A descrição do nível de interferência em diferentes publicações varia frequentemente devido a diferenças de condições,Por conseguinte, é aconselhável anexar amostras de controlo de qualidade interno a cada lote de experiências.. Através de um projecto de controlo razoável e do necessário pré-processamento, o efeito de interferência do HEPES pode ser eficazmente controlado,assegurando assim a autenticidade e a reprodutibilidade dos dados analisados.

Embalagem do produto

Como fabricante de tampões HEPES,DeshengA Comissão, em nome do seu grupo de trabalho, decidiu, em 1 de Julho de 2000, que a Comissão, em conformidade com o artigo 83.° do Tratado, deve proceder a uma avaliação dos resultados da investigação e da investigação, tendo em conta as conclusões do Conselho de Ministros, e, em especial, as conclusões do Conselho de Ministros.,Desheng recebeu elogios unânimes dos clientes.