Tris de qualidade analítica, agente tampão comumente utilizado em laboratórios: Características e cenários de aplicação

Em experimentos bioquímicos e de biologia molecular, soluções tampão são fundamentais para manter a estabilidade dos sistemas reacionais. Entre eles,Base Tris(tris(hidroximetil)aminometano) é um tampão biológico comumente usado. Este artigo apresenta as principais características e o escopo de aplicação típico do Tris de grau analítico.

Analise as características básicas do Tris puro

Pure Tris é um pó cristalino branco facilmente solúvel em água. Sua faixa de tamponamento eficaz é de pH 7,0 a 9,0, adequada para vários ambientes experimentais fracamente alcalinos. Este nível de produto possui alta pureza e rigoroso controle de impurezas, que pode atender aos requisitos de análises laboratoriais de rotina e experimentos bioquímicos.

Base Tris

Vários recursos dignos de nota:

1. Estabilidade química: Pure Tris pode ser armazenado por um longo tempo em condições secas, seladas e em temperatura ambiente. A solução preparada pode suportar esterilização em alta temperatura e alta pressão e não se decompõe facilmente.

2. Dissolução conveniente: Pode ser rapidamente dissolvido agitando em temperatura ambiente, facilitando o preparo de soluções de reserva de diferentes concentrações.

3. Baixa interferência de íons metálicos: Comparado com agentes tamponantes de fosfato, Tris tem capacidade quelante mais fraca para magíons nésio e cálcio, tornando-o adequado para sistemas de reação enzimática contendo esses íons.

4. Sensibilidade à temperatura: O valor do pH da solução Tris mudará com a temperatura. Por exemplo, uma solução tampão com pH de 8,0 preparada a 25°C aumentará o pH em cerca de 0,4 a 4°C e diminuirá em cerca de 0,3 a 37°C. Recomenda-se ajustar o valor do pH de acordo com a temperatura real de trabalho antes do uso.

Escopo de aplicação típico da análise Tris pura

O Tris puro analítico pode ser usado em vários experimentos biológicos e químicos convencionais, e a seguir estão vários cenários comuns.

1. Prepare a solução tampão TAE ou TBE para eletroforese em gel de agarose para detectar amostras de DNA ou RNA. Para análise rotineira de bandas de ácidos nucleicos, o nível de pureza analítica é totalmente competente. Se estiver envolvida manipulação de RNA de alta sensibilidade (como construção de biblioteca de microRNA), recomenda-se usar Tris de grau não nuclease.

2. Eletroforese de proteínas e transferência de membrana No sistema SDS-PAGE, Tris é usado para preparar tampão de gel de separação, tampão de gel concentrado e tampão de eletroforese. Além disso, o buffer de transferência no Western blot é frequentemente baseado em Tris. A pureza da análise Tris pura é suficiente para garantir a estabilidade destas experiências convencionais de proteínas.

3. Ao purificar proteínas marcadas com histidina usando colunas de níquel, o tampão de ácido clorídrico Tris é comumente usado para colunas de cromatografia de equilíbrio e eluição de proteínas alvo. O grau analítico não introduz impurezas adicionais e não afeta o efeito de purificação.

4. Adicione Tris como tampão auxiliar ao meio de cultura celular (como DMEM) para ajudar a manter a estabilidade do pH durante o processo de cultivo. Após a esterilização a alta pressão, o Tris puro pode ser usado diretamente para a preparação de soluções relacionadas à cultura celular.

5. Para qualquer titulação, análise colorimétrica ou calibração de pH que exija um ambiente tampão fracamente alcalino, o Tris analítico puro pode ser usado como uma escolha confiável.

Precauções de uso

A análise Pure Tris não é adequada para experimentos altamente sensíveis a nucleases ou íons metálicos. Além disso, devido à presença de grupos amino livres no Tris, pode interferir com certos métodos de quantificação de proteínas (como o método de Bradford), caso em que o método BCA ou sistema tampão pode ser utilizado. Preste atenção à prevenção de umidade durante o armazenamento e sele e guarde após a abertura.

Conclusão

Tris de grau analítico é um tampão de laboratório com desempenho estável e ampla aplicabilidade. Compreender suas características e limites de uso pode ajudar os experimentadores a fazer escolhas razoáveis, garantindo resultados experimentais e custos de aquisição.

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