生物学的バッファエージェントの選択は,細胞培養,細胞冷凍保存,および体外診断 (IVD) 試料の準備における実験および製品の安定性に直接影響します. HEPES Trisは2種類の高周波バッファシステムで,互換性はないが,独自の適用可能な境界線がある.この記事では分子構造と物理化学的性質から始まりますこの2つのシナリオの違いと典型的なシナリオを要約します.
1. なぜバッファエージェントは検討に値する
細胞のpHに対する敏感性はしばしば過小評価される.哺乳類の細胞にとって最適な環境は通常pH 7.2-7.4粘着状態,代謝率,表面マーカー発現に影響を与える可能性があります.バッファ剤の責任は,この範囲を安定させることです.
伝統的なバイカーボネート (NaHCO3/CO)₂低コストで生理学的関連性が強いが,5%のCO₂細胞がインキュベーターを離れると - 液体交換,洗浄,分類,輸送,冷凍前処理を経て -₂細胞培養システムに入ってくる理由です 細胞培養システムには
2分子構造が"個性"を決定する
HEPES (4-ヒドロキシエチルピペラジンエタノ硫酸) は,基本ピペラジン環と酸性硫酸群の両方を含むツウィテリオニックバッファリング剤である.その電荷は,生理学的pHで中性に近いそのpKaは約7.5 (25°C効果性バッファリング範囲は6.8〜8です.2細胞成長の生理学的範囲を正確にカバーしています
トリス (トリヒドロキシメチラミノメタン) は,PKaが約8.06 (25°C効果性バッファリング範囲は7.0〜9.0単純な構造と制御可能なコストを有し,分子生物学研究室で大きな用量を持つバッファエージェントの1つです.
構造的差異は,以下の4つの定量化可能な実用的な差異を直接導きます.
34次元における違い
3.1 HEPES の pKa 温度係数は約 -0.014/°CTrisは -0.028から -0.031/°C実用的な操作では,次のとおりです: 25 °CでTrisバッファをpH 8.0に調整します.°C4 に冷却した後°C冷室では測定したpHが著しく上昇し, 37で再び低下します.°Cしかし,HEPESのpKaは37で約7.3-7.4です.°C交差温度操作を必要とする細胞実験は,特に敏感です.
3.2 膜透過性および金属離子結合.HEPESは強い極性を持ち,細胞膜に容易に浸透することができない. Mg 2などの二価金属離子との結合能力+そしてCa2+酵素反応に必要なコファクターは取り上げられない.いくつかの金属イオンと複合体を形成し,アルデヒドといくつかの交叉結合剤と反応することもできます.金属依存酵素や特定のラベルシステムに関与する場合,追加の検証が必要です.
3.3 HEPESは,可視光と紫外線の吸収が非常に低いため,生化学反応に限られた影響を及ぼします.そして,スペクトロフォトメトリックと酵素検査における最小限の干渉光の被曝により自由基が生成され,光敏感細胞線や redox関連の研究は光回避操作を必要とします.Trisよりも高いトリスは,いくつかのタンパク質定量化方法に干渉を引き起こし,異なる検出キット製剤の許容限界は大きく異なります.使用前に特定の方法を確認することが推奨されます..
3.4 CO依存度₂細胞洗浄溶液にバイカーボネートシステムを補完する主な理由でもある.バッファの分類輸送保存ソリューション
4舞台は選択を決定する
細胞培養と細胞処理: 血清のない培養介質,細胞冷凍保存溶液,洗浄溶液,流量細胞測定バッファCAR-Tや幹細胞などの細胞療法製品の実験室での使用身体的 pH 対応と低膜透性により,HEPES はより互換性があります.
分子診断とタンパク質研究: 核酸抽出と増幅バッファ,電球解剖バッファシステム (TAE/TBE),SDS-PAGE,タンパク質浄化,トリスのバッファ範囲とコストの利点はより顕著です.
IVD反応剤:Trisは,化学発光および酵素結合免疫吸収剤アッセイ dilutionsなどのシステムにおける主要なバッファ剤としてしばしば使用されます.反応体系が金属イオンに敏感であるか,より厳格なpH安定性を要求する場合HEPESには利点があります.
実際には,この2つは同じプロセスで共存することが多い - 細胞処理の上流のHEPESと下流の検出のTris. "優れている"という前提は常に"どのような文脈で"である.
5選択後: 原材料の一貫性は長期的な変数です
試料の性能の変動は,通常,公式ではなく,原料のバッチの違いから生じる.純度,不純度スペクトル,湿度,バッファーの残留金属イオンは全て最終製品の安定性へと伝わります.
Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd (以前は武漢デシェン生化学技術株式会社として知られていた)2005年に設立された) は,長い間,生物学的バッファエージェントおよび関連する精細化学物質の研究と生産に専念してきました.Tris,HEPES,MOPS,Bicine,CAPSなどの50以上のモデルをカバーし,グラムからトンレベルまで供給とインデックスカスタマイズを提供することができます.会社の本部は広州統一科学技術都市に位置しています.湖北省エゾウのゲディアン開発区.ゲディアンと黄冈 (70エーカー) に2つの研究開発および生産基地があり,すべてのカテゴリーのための年間生産能力は5000トンです.製品がIVDのインビトロ診断に使用されていますバイオメディシンや 日常化学産業
HEPES とトリス基礎となる4つのパラメータである pKa,温度係数,膜透性,兼容性を理解することで処理温度と比較する細胞の種類や検出システムについては,通常,その答えが自発的に出てきます.安定した供給と一貫したバッチ品質は,公式が安定して再現される前提条件です..
