Búfer Bis Tris: características, aplicaciones y puntos clave de uso

bis-trisEs un tampón ampliamente utilizado en la investigación bioquímica. Como amina terciaria orgánica, transporta protones inestables con un valor de pKa de 6,46 a 25 grados Celsius y un rango de amortiguación eficaz que abarca un pH de 5,8 a 7,2. Pertenece al biobúfer zwitteriónico y lleva el nombre de su estructura molecular, que presenta las familias estructurales bis (2-hidroxietil) amina y Tris.

Propiedades físicas y químicas y solubilidad.

Bis Tris tiene un peso molecular de 209,2 y una fórmula molecular de C ₈ H ₁ NO ₅. Es altamente soluble en agua y no requiere métodos de solubilización especiales al preparar soluciones tampón. Su valor pKa es cercano a neutro, lo que lo hace adecuado para su uso en condiciones de acidez débil o casi neutra. A diferencia de algunos agentes tampón con alta absorción de UV, Bis Tris tiene una menor interferencia de fondo en las longitudes de onda de detección de UV comúnmente utilizadas y es adecuado para la detección mediante métodos fotométricos.

Escenarios de aplicación recomendados

Bis Tris tiene múltiples aplicaciones en la investigación de proteínas y ácidos nucleicos. Puede servir como tampón para la cromatografía de intercambio aniónico, ayudando a mantener la estabilidad del pH durante el proceso de separación; En experimentos de electroforesis, se puede utilizar no solo como tampón de electroforesis, sino también como componente del tampón de gel y del tampón de muestra. Cuando se utiliza junto con ACES, se puede utilizar como tampón de electroforesis en gel. Además, Bis Tris también es adecuado para experimentos de electroforesis en gel de agarosa. Bis Tris también tiene aplicaciones en espectroscopia de resonancia magnética nuclear y experimentos de cristalografía de rayos X.

Capacidad quelante de metales

Debido a la introducción de dos grupos hidroxietilo, la molécula de Bis Tris proporciona más átomos donantes de electrones de pares solitarios, exhibiendo así capacidad quelante hacia algunos iones metálicos, similar al EDTA o la bicina. Forma complejos fuertes con iones de plomo y cobre y exhibe interacciones débiles con iones metálicos comunes como magnesio, calcio, manganeso, cobalto, níquel, zinc y cadmio. Esta característica selectiva tiene ventajas y desventajas en aplicaciones prácticas: en sistemas que involucran iones de plomo o cobre, se debe prestar atención a la complejación, pero en la mayoría de los experimentos convencionales, las interacciones débiles con iones metálicos comunes no interfieren significativamente con el experimento.

Precauciones durante el uso

Bis Tris interactúa con las proteínas transportadoras de ácidos grasos del hígado humano, lo que puede afectar el comportamiento dinámico de las proteínas. Se debe prestar atención a la investigación relacionada con FABP. Además, Bis Tris no es adecuado para el ensayo de proteínas BCA porque su estructura molecular puede interferir con las reacciones colorimétricas, lo que da como resultado resultados sesgados en la cuantificación de proteínas. En el diseño experimental, si se necesita el método BCA para cuantificar proteínas en el futuro, se deben seleccionar otros sistemas tampón o se debe cambiar el método de cuantificación.

juicio integral

Bis Tris es un agente tampón integral con aplicaciones que cubren múltiples campos técnicos como electroforesis, cromatografía y espectroscopia. Como sustituto del dimetilarsinato de sodio, el ácido maleico y el citrato, tiene ventajas en materia de seguridad y control de interferencias. La capacidad quelante de los metales debe evaluarse basándose en sistemas experimentales específicos, y la interacción con las proteínas también requiere que los usuarios le presten atención en estudios específicos. Comprender correctamente estas características puede ayudar a utilizar el tampón Bis Tris de manera más razonable en experimentos bioquímicos.

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