Bis Trisé um tampão amplamente utilizado em pesquisas bioquímicas. Como uma amina terciária orgânica, ela carrega prótons instáveis com um valor de pKa de 6,46 a 25 graus Celsius e uma faixa de tamponamento eficaz cobrindo pH de 5,8 a 7,2. Pertence ao biotampão zwitteriônico e tem esse nome devido à sua estrutura molecular, que apresenta as famílias estruturais bis (2-hidroxietil) amina e Tris.
Propriedades físicas e químicas e solubilidade
Bis Tris tem um peso molecular de 209,2 e uma fórmula molecular de C ₈ H ₁ NO ₅. É altamente solúvel em água e não requer métodos especiais de solubilização na preparação de soluções tampão. Seu valor de pKa é próximo do neutro, tornando-o adequado para uso em condições fracamente ácidas a quase neutras. Ao contrário de alguns agentes tampão com alta absorção de UV, o Bis Tris tem menor interferência de fundo em comprimentos de onda de detecção de UV comumente usados e é adequado para detecção usando métodos fotométricos.
Cenários de aplicação recomendados
Bis Tris tem múltiplas aplicações na pesquisa de proteínas e ácidos nucléicos. Pode servir como tampão para cromatografia de troca aniônica, ajudando a manter a estabilidade do pH durante o processo de separação; Em experimentos de eletroforese, pode ser usado não apenas como tampão de eletroforese, mas também como componente de tampão de gel e tampão de amostra. Quando usado em conjunto com ACES, pode ser usado como tampão de execução de eletroforese em gel. Além disso, Bis Tris também é adequado para experimentos de eletroforese em gel de agarose. Bis Tris também tem aplicações em espectroscopia de ressonância magnética nuclear e experimentos de cristalografia de raios X.
Capacidade quelante de metais
Devido à introdução de dois grupos hidroxietil, a molécula Bis Tris fornece mais átomos doadores de elétrons de pares solitários, exibindo assim capacidade quelante para alguns íons metálicos, semelhante ao EDTA ou Bicina. Forma complexos fortes com íons de chumbo e íons de cobre e exibe interações fracas com íons metálicos comuns, como magnésio, cálcio, manganês, cobalto, níquel, zinco e cádmio. Esta característica seletiva tem vantagens e desvantagens em aplicações práticas: em sistemas que envolvem íons de chumbo ou cobre, deve-se prestar atenção à complexação, mas na maioria dos experimentos convencionais, interações fracas com íons metálicos comuns não interferem significativamente no experimento.
Precauções durante o uso
Bis Tris interage com proteínas de ligação de ácidos graxos do fígado humano, o que pode afetar o comportamento dinâmico das proteínas. Deve ser dada atenção à investigação relacionada com a FABP. Além disso, o Bis Tris não é adequado para o ensaio de proteína BCA porque a sua estrutura molecular pode interferir nas reações colorimétricas, resultando em resultados tendenciosos de quantificação de proteínas. No desenho experimental, se o método BCA for necessário para quantificar proteínas no futuro, outros sistemas tampão deverão ser selecionados ou o método de quantificação deverá ser alterado.
julgamento abrangente
Bis Tris é um agente tampão abrangente com aplicações que abrangem vários campos técnicos, como eletroforese, cromatografia e espectroscopia. Como substituto do dimetilarsinato de sódio, ácido maleico e citrato, apresenta vantagens em segurança e controle de interferências. A capacidade quelante dos metais precisa ser avaliada com base em sistemas experimentais específicos, e a interação com proteínas também exige que os usuários prestem atenção a ela em estudos específicos. A compreensão correta dessas características pode ajudar a usar o tampão Bis Tris de maneira mais razoável em experimentos bioquímicos.
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