Plusieurs conseils pratiques pour utiliser le tampon Tris de qualité analytique

Le tampon Tris est l'un des réactifs les plus fréquemment préparés dans les laboratoires de biochimie.Le Tris de qualité analytique est devenu un choix quotidien pour de nombreux laboratoires en raison de sa bonne pureté et de son prix modéré.. Voici quelques expériences pratiques qui méritent d'être prises en considération lors de l'utilisation d'analyseurs pursTris tamponde plusieurs points de vue opérationnels.

L'effet de la température sur la valeur du pH

De nombreux expérimentateurs ont rencontré des situations où la solution tampon Tris est ajustée avec précision à un pH de 8,0 à température ambiante, placée dans un réfrigérateur à 4 °C ou un incubateur à 37 °C, puis mesurée à nouveau,seulement pour constater que la valeur du pH a changéIl ne s'agit pas d'une erreur de configuration, mais plutôt des propriétés physiques et chimiques de Tris elle-même.le pKa diminue et le pH de la solution diminueLorsque la température diminue, le pKa augmente et le pH de la solution augmente; l'amplitude de ce changement dans le Tris pur est d'environ 0,025 à 0,03 unités de pH par degré Celsius.Par exemple:, une solution tampon préparée et calibrée à un pH de 8,0 à 25 °C a un pH réel d'environ 8,4 à 4 °C et d'environ 7,7 à 37 °C. La solution de ce problème n'est pas compliquée:calibrer la valeur du pH à la température réelle utilisée dans l'expérienceSi l'expérience est réalisée dans un entrepôt froid, la solution tampon doit être placée dans le entrepôt froid pour refroidir, et le pH doit être ajusté après que la température se soit stabilisée.Après avoir compris cette caractéristique, de nombreuses fluctuations expérimentales causées par un pH inexact peuvent être améliorées.

Tris tampon

La Tris pure peut-elle être utilisée pour des expériences d'ARN?

Cette question nécessite de distinguer le type d'expérience. Si seule une électrophorèse au gel d'agarose d'ARN ordinaire est utilisée pour observer l'intégrité de l'ARN total,Un tampon TAE ou MOPS préparé par analyse du Tris pur peut normalement être utilisé.Mais si l'expérience implique des opérations de haute sensibilité telles que la transcription inverse, la PCR quantitative par fluorescence en temps réel, ou la construction de bibliothèques d'ARN,des traces de RNase dans le tampon peuvent entraîner une dégradation de l'ARNLa qualité d'analyse Tris n'élimine pas spécifiquement les nucléases pendant le processus de production, donc pour les expériences sensibles mentionnées ci-dessus,il est recommandé d' utiliser Tris sans nucléasesSi le laboratoire n'analyse que du Tris pur, il est possible d'envisager d'utiliser de l'eau traitée au DEPC pour préparer une solution tampon, puis de la stérilisation à haute pression pour éliminer une partie de l'activité de la RNase.mais cela ne peut pas répondre pleinement aux normes professionnellesLe choix du niveau de réactif correspondant en fonction des exigences de sensibilité de l'expérience est une approche relativement sûre.

Conservation et utilisation répétée de la solution tampon

De nombreux laboratoires prépareront des volumes plus importants de tampon Tris à la fois, comme des solutions de base avec 10 fois la concentration.surtout lorsque le pH est proche de neutreIl est recommandé d'effectuer une stérilisation à haute pression sur la solution tampon préparée, de la traiter à 121 degrés Celsius pendant 20 minutes, de la refroidir à température ambiante après stérilisation,et ajuster la valeur du pH en fonction des besoins expérimentauxLa solution stérilisée peut être conservée pendant des semaines à des mois sous une température ambiante scellée et dans l'obscurité.il indique qu'il a été contaminé par des micro-organismes et doit être préparéPour les solutions tampons d'électrophorèse telles que TAE ou TBE, les solutions préparées avec la qualité analytique Tris peuvent être réutilisées deux à trois fois.mais l'effet d'électrophorèse peut légèrement diminuer après chaque utilisationIl est recommandé d'envisager le recyclage lorsqu'il est utilisé pour des échantillons non critiques.

Sélection de la méthode de quantification des protéines

Une caractéristique facilement négligée de l'analyse Tris pure est qu'elle contient des groupes aminés libres qui réagissent avec certains réactifs de quantification des protéines.lorsque la méthode de Bradford est utilisée pour déterminer la concentration en protéinesÀ ce stade, les méthodes BCA ou Lowry peuvent être utilisées à la place, car ces deux méthodes sont moins affectées par l'interférence Tris.Si les conditions de laboratoire sont limitées et que seule la méthode de Bradford peut être utilisée, la concentration de Tris dans le tampon peut être réduite, ou Tris de la même concentration peut être préparé comme un témoin blanc à l'aide d'échantillons standard pour l'étalonnage.

Quels indicateurs doivent être pris en considération lors des marchés publics

Lors de l'achat et de l'analyse du Tris pur, plusieurs indicateurs figurant dans le rapport d'inspection de la qualité méritent d'être pris en compte: pureté, teneur en humidité, résidus de métaux lourds et résidus d'incinération.Il existe des différences dans ces indicateurs entre les produits de différentes marquesEn outre, les spécifications d'emballage doivent également être prises en compte.Les laboratoires disposant de grandes quantités peuvent choisir un emballage de 500 g ou 1 kg pour réduire les coûts d'une seule utilisation..

Conclusion

Le Tris pur analytique est un réactif de base fiable.Il peut jouer un bon rôle de tampon dans la plupart des expériences de routinePour le personnel des marchés publics et des laboratoires, la clarification de ces conditions d'utilisation permet également de mieux évaluer les besoins réels du laboratoire.

Emballage du produit

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