Aplicación y precauciones del HEPES en experimentos relacionados con ácidos nucleicos

Η έρευνα και η λειτουργία των νουκλεϊκών οξέων έχουν ειδικές απαιτήσεις για το περιβάλλον του διαλύματος και η επιλογή του συστήματος αποθήκευσης επηρεάζει άμεσα τη σταθερότητα των νουκλεϊκών οξέων,αποδοτικότητα ηλεκτροφορετικού διαχωρισμού, και την αποτελεσματικότητα των ενζυμικών αντιδράσεων.Ταμείο ασφαλείας HEPESέχει εφαρμοστεί σε πολλαπλά πειραματικά στάδια που σχετίζονται με το DNA και το RNA λόγω των ήπιων χημικών ιδιοτήτων του και της σταθερής ικανότητας ελέγχου του pH.Η κατανόηση των χαρακτηριστικών της συμπεριφοράς του σε συστήματα νουκλεϊνών οξέων μπορεί να βοηθήσει στην βελτιστοποίηση των λειτουργικών διαδικασιών και την απόκτηση πιο αξιόπιστων πειραματικών αποτελεσμάτων.

Διατήρηση του pH κατά τη διαδικασία εξαγωγής νουκλεϊκού οξέος

Η διαδικασία εκχύλισης του νουκλεϊκού οξέος περιλαμβάνει κυτταρική λύση, πέψη πρωτεάσης και ανασύσταση κατά ρύπανση.το pH του διαλύματος μπορεί να κυμαίνεται λόγω της προσθήκης απόσβεσης λύσης ή της απελευθέρωσης ομογενούς ιστούΤο HEPES μπορεί να παρέχει ένα σταθερό περιβάλλον αποθήκευσης σε αυτό το στάδιο, προστατεύοντας τα μόρια νουκλεϊκού οξέος από την αποδόμηση οξέος-βάσης, ειδικά για το μονοκύτταρο RNA,των οποίων οι αλλαγές του pH του ζεύγους βάσεων είναι πιο ευαίσθητες από το DNAΕπιπλέον, το HEPES δεν συνυποβάλλεται εύκολα με τα νουκλεϊκά οξέα και δεν περιέχει μεγάλη ποσότητα συστατικών αλατιού απόσβεσης στα στάδια κατακλίσεως της αιθανόλης ή της ισοπροπανόλης.που είναι ευεργετικό για την επακόλουθη ανασύσταση και τον προσδιορισμό της καθαρότηταςΓια δείγματα νουκλεϊκού οξέος που απαιτούν μακροχρόνια διατήρηση μετά την εξαγωγή, η χρήση ενός αποθηκευτικού αποθέματος χαμηλής συγκέντρωσης που παρασκευάζεται με HEPES μπορεί να μειώσει την απόκλιση του pH κατά τη διάρκεια επαναλαμβανόμενων κύκλων κατάψυξης-ανάψυξης.

Η συσκευασία Hepes

Συμφωνία με αντιδράσεις διάσπασης και σύνδεσης των ενζύμων περιορισμού

Οι ενδοπυρήνες περιορισμού και οι συνδέσεις DNA συνήθως παρουσιάζουν βέλτιστη δραστηριότητα σε συγκεκριμένα αναιρεστικά συστήματα.Η εφαρμοσιμότητα του HEPES σε τέτοιες αντιδράσεις είναι ευνοϊκή λόγω του αδύναμου συντονισμού του με διουσιώδη κατιανούς.Τα περισσότερα ένζυμα περιορισμού μπορούν να διατηρήσουν αποδεκτή απόδοση διαχωρισμού στο σύστημα HEPES, ειδικά μεταξύ pH 7.0 και 8.0Ωστόσο, υπάρχουν διαφορές στην ανοχή των ενζύμων από διαφορετικούς κατασκευαστές ή πηγές σε συστατικά απόσβεσης.συνιστάται να συγκριθεί το σύστημα HEPES με το μπουφέρο αντιστοίχισης ενζύμων για να επιβεβαιωθεί αν η σχετική δραστηριότητα πληροί τις πειραματικές απαιτήσεις.Κατά την αντίδραση σύνδεσης, η παρουσία του HEPES συνήθως δεν παρεμβαίνει σημαντικά στην καταλυτική λειτουργία της T4 λιγάσης.αλλά όταν υπάρχουν υψηλές συγκεντρώσεις EDTA ή άλλων χηλατικών ουσιών στο σύστημα αντίδρασης, πρέπει να δοθεί προσοχή στη ρύθμιση της ισορροπίας ιόντων.

Ειδικές εκτιμήσεις στα πειράματα RNA

Η σταθερότητα των μορίων RNA είναι χαμηλότερη από εκείνη του DNA και είναι ευαίσθητες στη διάσπαση από ριβοπυρηνικές ουσίες και αλκαλική υδρόλυση.Το απόθεμα ασφαλείας που προετοιμάζεται από το HEPES μπορεί να παρέχει ένα ασφαλές περιβάλλον για το RNA στο σχεδόν ουδέτερο εύρος, και η χαμηλότερη τάση για χηλίωση ιόντων μετάλλων βοηθά στη διατήρηση της φυσικής κατάστασης της δευτερογενούς δομής του RNA.το σύστημα θωράκισης HEPES χρησιμοποιείται εν μέρει σε εμπορικά κιτ αντιδραστηρίων, η οποία έχει ελάχιστη παρεμβολή στην δραστηριότητα της αντίστροφης μεταγραφής.πρέπει να σημειωθεί ότι το διάλυμα HEPES που χρησιμοποιείται για πειράματα RNA πρέπει να υποβάλλεται σε ενδελεχή επεξεργασία για την αφαίρεση της RNase και να παρασκευάζεται με νερό χωρίς νουκλεάση, διαφορετικά η υπολειπόμενη δραστηριότητα των ενζύμων θα προκαλέσει σοβαρή βλάβη στην ποιότητα του RNA.Το διάλυμα HEPES πρέπει να αποφεύγεται η παρατεταμένη έκθεση στο φως για να μειωθεί η δημιουργία αντιδραστικών ειδών οξυγόνου που μπορεί να βλάψουν το RNA..

Εφαρμογή και περιορισμοί στην ηλεκτροφορέση νουκλεϊκών οξέων

Τα συνηθισμένα χρησιμοποιούμενα συστήματα ασφαλείας της ηλεκτροφορέσης με τζελ αγαρόζης νουκλεϊκού οξέος περιλαμβάνουν τα TAE και TBE.αλλά σε ορισμένες ειδικές εφαρμογές, όπως η ηλεκτροφόρηση με δημητριασμένο τζελ ή η ηλεκτροφόρηση με μη δημητριασμένο συμπλέγμα πρωτεϊνών νουκλεϊκών οξέωνΤο HEPES μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως εναλλακτικός απόσβεσης. Το πλεονέκτημα του έγκειται στην παραγωγή λιγότερης θερμότητας κατά την ηλεκτροφορέση, η οποία βοηθά στη διατήρηση της ακεραιότητας των πρωτεϊνικών συμπλεγμάτων νουκλεϊκών οξέων.η χρήση του HEPES στην ηλεκτροφορέση έχει περιορισμούςΗ ανάλυση των διαστάσεων των ινών είναι σημαντικά χαμηλότερη από αυτή των παραδοσιακών διαλύσεων ηλεκτροφορήσεως.Το HEPES μπορεί να παράγει ηλεκτροσμοτική ροή κατά τη διάρκεια της μακροχρόνιας ηλεκτροφορέσηςΕάν επιλεγεί το HEPES ως απο tampon ηλεκτροφόρησης, συνιστάται να δοκιμαστεί εκ των προτέρων η επίδραση διαχωρισμού σε ένα μικρό τζελ.

HEPES σκόνη απόσβεσης

Συνολικές προτάσεις χρήσης

Το HEPES έχει ορισμένη ευελιξία και εφαρμοσιμότητα σε πειράματα νουκλεϊκών οξέων, ιδιαίτερα κατάλληλο για καταστάσεις που απαιτούν ήπια λειτουργία υπό σχεδόν ουδέτερες συνθήκες pH.Η επιλογή του HEPES θα πρέπει να κρίνεται με βάση τον συγκεκριμένο πειραματικό τύπο και τις απαιτήσεις των αντιδραστηρίων υποστήριξης.Για τα εμπορικά κιτ αντιδραστήρων με ειδικά διαλύματα-απόσβεση, συνιστάται να ακολουθούνται κατά προτεραιότητα οι συστάσεις του κατασκευαστή και να αποφεύγεται η αυθαίρετη αλλαγή του συστήματος-απόσβεσης.Στην ανεξάρτητη πειραματική διαδικασία, η αποτελεσματικότητα του HEPES μπορεί να συγκριθεί συστηματικά με άλλα συνηθισμένα χρησιμοποιούμενα αντισυλληπτικά στην προ- πειραματική φάση,και μπορούν να επιλεγούν οι πιο ευνοϊκές συνθήκες για τη σταθερότητα και την ανίχνευση των μορίων νουκλεϊνικού οξέος-στόχουςΜέσα από λεπτομερή συγκριτική επαλήθευση, το HEPES μπορεί να γίνει μια πρακτική εναλλακτική λύση στα εργαστηριακά εργαστηριακά κέντρα νουκλεϊκών οξέων.

Ως κατασκευαστής θολωτών HEPES, η Desheng παρακολουθεί αυστηρά την ποιότητα των προϊόντων και συγκροτεί τμήμα ποιότητας για τον έλεγχο παρτίδων προϊόντων.Μόνο όταν η συσκευασία και η ποιότητα πληρούν τα πρότυπα μπορούν να πωληθούν από το εργοστάσιο.Ως εκ τούτου, η Desheng έχει λάβει ομόφωνα έπαινο από τους πελάτες. Αν έχετε σχετικές προθέσεις, κάντε κλικ στην ιστοσελίδα για να ρωτήσετε για λεπτομέρειες και αγορά!