Tamponi biologici comuni per la purificazione delle proteine

Il mantenimento di un ambiente di pH stabile durante la purificazione delle proteine è la base per proteggere l'attività della proteina bersaglio.Diversi metodi di depurazione e campioni di proteine hanno requisiti diversi per i sistemi tampone.BIS-TRIS, MOPS, PIPES, TES, Tris HCl e altre sei soluzioni tampone hanno ciascuna scenari specifici applicabili e precauzioni d'uso.

BIS-TRIS: tampone per elettroforesi multifunzionale

L' intervallo di tamponamento efficace di BIS-TRIS è pH 5,8 a 7.2, e ha prestazioni eccezionali in applicazioni relative all'elettroforesi. Può essere utilizzato come tampone di elettroforesi, tampone di gel e tampone di campione per diversi tipi di esperimenti di elettroforesi,e può essere utilizzato anche come tampone di funzionamento dell'elettrforesi gel in combinazione con tampone ACESÈ inoltre adatto per l'elettroforesi del gel di agarosio e la cromatografia per lo scambio di anioni, nonché per la spettroscopia NMR e gli esperimenti di cristallografia a raggi X.BIS-TRIS deve essere osservato durante l' uso in quanto interagisce con le proteine che legano gli acidi grassi del fegato umanoInoltre forma complessi forti con ioni di piombo e rame e deve essere usato con cautela nei sistemi che coinvolgono questi ioni metallici.

MOPS e PIPES: scelte comuni per la purificazione cromatografica

L'intervallo di tamponamento di MOPS è pH da 6,5 a 7.9, utilizzato principalmente nei metodi cromatografici per la purificazione delle proteine.che possono influenzare la stabilità della proteina.

L'intervallo di tamponamento di PIPES è pH da 6,1 a 7.5Una caratteristica importante del PIPES è la sua mancanza di capacità di formare chelati con la maggior parte degli ioni metallici,che lo rende adatto come tampone non coordinante in soluzioni contenenti ioni metalliciQuesta caratteristica gli conferisce un vantaggio unico nella depurazione delle metalloproteine o negli esperimenti con ioni metallici.

TES: Applicabilità delle tecniche di cromatografia multipla

L'intervallo di tamponamento del TES è pH da 6,8 a 8.2Può essere utilizzato come sistema tampone nell'analisi dell'attività enzimatica, nonché nella cromatografia a filtrazione gel e nella cromatografia di affinità.In cromatografia a scambio di anioni, TES può fornire un ambiente pH stabile, che è utile per la separazione e la purificazione delle proteine bersaglio.Va notato che il TES non è adatto al metodo di determinazione delle proteine dell'acido diopsionico e può anche interferire con i risultati di determinazione delle proteine del metodo di legame del colorante Bradford.La scelta dei metodi di quantificazione delle proteine deve evitare questi due sistemi di rilevamento.

Tris HCl: componenti chiave nella SDS-PAGE

L'intervallo di tampone di Tris HCl è pH da 7,0 a 9.0Nella cromatografia a interazione idrofoba, viene utilizzato come componente per la separazione e la dialisi delle soluzioni.Il Tris HCl svolge anche un ruolo nel mantenimento della stabilità del pH nella fase di carico del campione della cromatografia a scambio ionico e nella soluzione di substrato della cromatografia di affinitàL'applicazione più conosciuta è come componente di tampone per elettroforesi e tampone gel in SDS-PAGE, che è il componente principale del sistema tampone Laemmli.

Quando si sceglie un tampone per la depurazione delle proteine, è necessario considerare in modo completo le caratteristiche della proteina bersaglio, i requisiti del metodo di depurazione,e la compatibilità della rilevazione successiva. se l'intervallo di pH del tampone copre l'intervallo stabile della proteina bersaglio, se interagisce con gli ioni metallici,e se interferisce con i metodi di quantificazione delle proteine comunemente utilizzati sono tutti fattori che devono essere bilanciati nel lavoro praticoLa scelta del giusto sistema di tampone può fornire una garanzia ambientale stabile per gli esperimenti di purificazione delle proteine.

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