Tampões biológicos comuns para purificação de proteínas

Manter um ambiente de pH estável durante a purificação de proteínas é a base para proteger a atividade da proteína alvo. Diferentes métodos de purificação e amostras de proteínas têm requisitos diferentes para sistemas tampão.BIS-TRIS, MOPS, PIPES, TES, Tris HCl e outras seis soluções tampão, cada uma com cenários específicos aplicáveis ​​e precauções de uso.

BIS-TRIS: Tampão de eletroforese multifuncional

A faixa de tamponamento eficaz do BIS-TRIS é de pH 5,8 a 7,2 e apresenta excelente desempenho em aplicações relacionadas à eletroforese. Ele pode ser usado como tampão de eletroforese, tampão de gel e tampão de amostra para diferentes tipos de experimentos de eletroforese, e também pode ser usado como tampão de execução de eletroforese em gel em combinação com tampão ACES. Também é adequado para eletroforese em gel de agarose e cromatografia de troca aniônica, bem como para espectroscopia de RMN e experimentos de cristalografia de raios X. O BIS-TRIS deve ser observado durante o uso, pois interage com as proteínas de ligação aos ácidos graxos do fígado humano, o que pode afetar a dinâmica das proteínas. Também forma complexos fortes com íons de chumbo e cobre e deve ser usado com cautela em sistemas que envolvam esses íons metálicos.

MOPS e PIPES: escolhas comuns para purificação cromatográfica

A faixa de tamponamento do MOPS é de pH 6,5 a 7,9, usada principalmente em métodos cromatográficos para purificação de proteínas. Ao usar MOPS, deve-se notar que ele pode interagir com a estrutura peptídica da albumina sérica bovina, o que pode afetar a estabilidade da proteína.

A faixa de tamponamento do PIPES é de pH 6,1 a 7,5 e também é comumente usada em métodos cromatográficos para purificação de proteínas. Uma característica proeminente do PIPES é a sua falta de capacidade de formar quelatos com a maioria dos íons metálicos, tornando-o adequado como tampão não coordenado em soluções contendo íons metálicos, sem interferir em sistemas experimentais envolvendo íons metálicos. Esta característica confere-lhe uma vantagem única na purificação de metaloproteínas ou experimentos envolvendo íons metálicos.

TES: Aplicabilidade de Múltiplas Técnicas de Cromatografia

A faixa de tamponamento do TES é de pH 6,8 a 8,2, cobrindo a maioria das condições fisiológicas de pH. Pode ser usado como sistema tampão na análise de atividade enzimática, bem como em cromatografia de filtração em gel e cromatografia de afinidade. Na cromatografia de troca aniônica, o TES pode fornecer um ambiente de pH estável, o que é útil para a separação e purificação de proteínas alvo. Deve-se notar que o TES não é adequado para o método de determinação de proteínas do ácido dipsiônico e também pode interferir nos resultados da determinação de proteínas do método de ligação do corante Bradford. Ao escolher métodos de quantificação de proteínas, é necessário evitar estes dois sistemas de detecção.

Tris HCl: Componentes principais em SDS-PAGE

A faixa tampão do Tris HCl é de pH 7,0 a 9,0, inclinando-se para a faixa alcalina. Na cromatografia de interação hidrofóbica, é utilizado como componente para separação e soluções de diálise. Tris HCl também desempenha um papel na manutenção da estabilidade do pH na etapa de carregamento da amostra da cromatografia de troca iônica e na solução de substrato da cromatografia de afinidade. A aplicação mais conhecida é como componente do tampão de eletroforese e tampão de gel em SDS-PAGE, que é o componente principal do sistema tampão Laemmli.

Ao selecionar um tampão de purificação de proteínas, é necessário considerar de forma abrangente as características da proteína alvo, os requisitos do método de purificação e a compatibilidade da detecção subsequente. Se a faixa de pH do tampão cobre a faixa estável da proteína alvo, se ele interage com íons metálicos e se interfere nos métodos de quantificação de proteínas comumente usados, são fatores que precisam ser equilibrados no trabalho prático. A escolha do sistema tampão correto pode fornecer uma garantia ambiental estável para experimentos de purificação de proteínas.

Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. é especializada na produção deagentes tampão biológicos, incluindo BIS-TRIS, MOPS, PIPES, TES, Tris HCl e outros agentes tampão, que são produtos de grande venda. Se você tiver alguma necessidade de compra em um futuro próximo, não hesite em entrar em contato comigo a qualquer momento!