Tampones biológicos comunes para la purificación de proteínas.

Mantener un entorno de pH estable durante la purificación de proteínas es la base para proteger la actividad de la proteína objetivo. Los diferentes métodos de purificación y muestras de proteínas tienen diferentes requisitos para los sistemas tampón.BIS-TRIS, MOPS, PIPES, TES, Tris HCl y otras seis soluciones tampón tienen cada una escenarios aplicables y precauciones de uso específicos.

BIS-TRIS: Tampón de electroforesis multifuncional

El rango de amortiguación efectivo de BIS-TRIS es de pH de 5,8 a 7,2 y tiene un rendimiento excelente en aplicaciones relacionadas con la electroforesis. Puede usarse como tampón de electroforesis, tampón de gel y tampón de muestra para diferentes tipos de experimentos de electroforesis, y también puede usarse como tampón de ejecución de electroforesis en gel en combinación con el tampón ACES. También es adecuado para electroforesis en gel de agarosa y cromatografía de intercambio aniónico, así como para experimentos de espectroscopia de RMN y cristalografía de rayos X. Se debe tener en cuenta BIS-TRIS durante su uso, ya que interactúa con las proteínas fijadoras de ácidos grasos del hígado humano, lo que puede afectar la dinámica de las proteínas. También forma complejos fuertes con iones de plomo y cobre y debe usarse con precaución en sistemas que involucran estos iones metálicos.

MOPS y TIPES: opciones comunes para la purificación cromatográfica

El rango de tampón de MOPS es de pH 6,5 a 7,9 y se utiliza principalmente en métodos cromatográficos para la purificación de proteínas. Cuando se utiliza MOPS, cabe señalar que puede interactuar con el esqueleto peptídico de la albúmina sérica bovina, lo que puede afectar la estabilidad de la proteína.

El rango de amortiguación de PIPES es de pH de 6,1 a 7,5 y también se usa comúnmente en métodos cromatográficos para la purificación de proteínas. Una característica destacada de PIPES es su falta de capacidad para formar quelatos con la mayoría de los iones metálicos, lo que lo hace adecuado como tampón no coordinante en soluciones que contienen iones metálicos, sin interferir con los sistemas experimentales que involucran iones metálicos. Esta característica le otorga una ventaja única en la purificación de metaloproteínas o experimentos con iones metálicos.

TES: Aplicabilidad de múltiples técnicas de cromatografía

El rango de amortiguación de TES es de pH de 6,8 a 8,2, y cubre la mayoría de las condiciones de pH fisiológico. Puede utilizarse como sistema tampón en análisis de actividad enzimática, así como en cromatografía de filtración en gel y cromatografía de afinidad. En la cromatografía de intercambio aniónico, TES puede proporcionar un entorno de pH estable, lo que resulta útil para la separación y purificación de proteínas objetivo. Cabe señalar que TES no es adecuado para el método de determinación de proteínas del ácido diopsiónico y también puede interferir con los resultados de la determinación de proteínas del método de unión de colorante Bradford. A la hora de elegir métodos de cuantificación de proteínas, es necesario evitar estos dos sistemas de detección.

Tris HCl: componentes clave en SDS-PAGE

El rango de tampón de Tris HCl es de pH 7,0 a 9,0, inclinándose hacia el rango alcalino. En la cromatografía de interacción hidrófoba, se utiliza como componente para soluciones de separación y diálisis. Tris HCl también desempeña un papel en el mantenimiento de la estabilidad del pH en el paso de carga de la muestra de la cromatografía de intercambio iónico y la solución de sustrato de la cromatografía de afinidad. La aplicación más conocida es como componente del tampón de electroforesis y del tampón de gel en SDS-PAGE, que es el componente principal del sistema tampón Laemmli.

Al seleccionar un tampón de purificación de proteínas, es necesario considerar exhaustivamente las características de la proteína objetivo, los requisitos del método de purificación y la compatibilidad de la detección posterior. Si el rango de pH del tampón cubre el rango estable de la proteína objetivo, si interactúa con iones metálicos y si interfiere con los métodos de cuantificación de proteínas comúnmente utilizados son factores que deben equilibrarse en el trabajo práctico. La elección del sistema tampón correcto puede proporcionar una garantía ambiental estable para los experimentos de purificación de proteínas.

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