세포 배양에 대한 논의에서HEPES이 주장은 방향적으로는 옳지만 "최고 한계도 없다"는 식으로 오해될 수 있습니다. 실제 작업에서,그리고 오스모틱 압력이 제대로 처리되지 않습니다, 실험 결과는 여전히 오차할 것입니다.
1- 널리 언급된 안전 간격
데?? 의 일반적인 권장량은 10-25mM이며, 인큐베이터 밖에서 작동할 때 버퍼 용량을 보충하는 데 사용될 수 있습니다.상업적으로 이용 가능한 문화 미디어에 대한 일반적인 공식도 이 범위에 속합니다.예를 들어 DMEM/F-12은 종종 15mM, DMEM은 종종 25mM을 포함합니다.
이 간격이 반복적으로 인용되는 이유는 두 가지 조건을 동시에 충족시키기 때문입니다.추가 오스모틱 압력이 여전히 수용 범위 내에서 장기를 도입하는 동안.
2고위 농도 제한은 어디에서 왔습니까?
농도를 무한히 높일 수 없는 이유는 크게 세 가지입니다.
1오스모틱 압력. 이것은 가장 직접적인 것입니다. 자유 산, 알칼리 또는 나트륨 소금의 형태로 HEPES를 추가하면 용액의 오스모틱 압력이 증가합니다.대부분의 포유류 세포의 허용 범위는 260~350mOsm/kg입니다.농도가 높을수록 NaCl 또는 NaHCO3에서 더 많은 양을 빼야하며 공식 조정 공간이 작습니다.
2광독성. 이것은 쉽게 간과되는 점입니다. HEPES는 가시광선 방사선 아래에서 수소 과산화 등 반응성 산소 종을 생성할 수 있습니다.특히 배양 매체에 리보플라빈이 존재할 때따라서 HEPES를 포함하는 배양 매체는 빛에서 멀리 보관되고 다루어야 합니다.MOPS 시스템을 사용하거나 빛의 강도를 줄이고 반응성 산소 종 스카버저를 추가하는 등의 방법을 채택하는 것이 좋습니다..
3높은 농도의 직접적 영향 기술 자료에 따르면 농도가 40mM를 초과하면 일부 세포 라인은 억제 된 증식과 형태적 변화를 경험할 수 있습니다.이러한 효과에 대한 감수성에 상당한 세포 라인 차이점이 있음을 명확히 해야 합니다., 모든 세포가 같지는 않으며, 보편적인 "독성 한계"도 존재하지 않습니다.
3왜 '독성'의 결론은 항상 모호해 보이는가?
관련 자료를 조사 할 때 HEPES의 세포 독성에 대한 결론은 종종 불일치하다는 것을 알 수 있습니다. 이것은 데이터 품질의 문제가 아닙니다.하지만 실험 조건 자체의 중요한 차이:
서로 다른 세포 종류: 종양 세포 라인 의 원세포 와 줄기 세포 에 대한 내성 은 크게 다를 수 있다
다른 조명 조건: 노출 시간 및 빛 강도는 반응성 산소 종의 발생에 직접 영향을 미칩니다.
배양 매체의 다른 구성 요소: 리보플라빈과 같은 광감각성 구성 요소의 함량은 주요 변수입니다.
다른 노출 기간: 몇 시간 단기 작업과 몇 일 장기 재배, 결론은 직접 비교 할 수 없습니다.
다양한 종말점이 결정됩니다: 증식 억제, 형태적 변화, 폐사, 대사 활동, 다른 것을 측정
따라서, "특정 농도가 특정 세포에 독성이 있다"는 결론을 볼 때, 먼저 실험 조건이 자신의 시스템과 비교될 수 있는지 확인해야 한다.
4자신의 세포에 대한 작업 농도를 결정
다른 사람의 숫자를 사용하는 대신, 더 신뢰할 수 있는 접근법은 작은 규모의 그라디언트 실험을 수행하는 것입니다.
성향을 설정: 0, 10, 15, 20, 25mM (위 한도를 탐색하려면 40mM 그룹을 추가 할 수 있습니다)
통일 pH: 합성 효과로 pH 차이를 잘못 판단하지 않도록 모든 그룹의 최종 pH를 일관되게 조정합니다 (예를 들어 7.4)
동시 접종: 세포 밀도, 배양 매체의 기본 수식과 혈청 팩은 0mM을 통제량으로 유지됩니다.
관찰 기간: 실제 재배 기간, 예를 들어 5-7 일
모니터링 지표: 생체 형태 및 컨버전스의 일일 현미경 관찰, 생명력 테스트로 정량화 된 최종점 (CCK-8, MTT 또는 테이블 블루)
오스모틱 압력 기록: 농도 효과와 오스모틱 압력 효과를 구별하기 위해 각 그룹의 측정 된 오스모틱 압력을 함께 기록합니다.
원자세포와 줄기세포와 같은 민감한 세포의 경우 낮은 농도에서 테스트를 시작하여 조명 조건을 함께 기록하는 것이 좋습니다.
5위험을 줄이기 위한 4가지 운영 습관
농도는 더 높은 농도를 뒷받침하는 명확한 실험 증거가 없는 한 25mM를 초과해서는 안됩니다.
전체 과정은 빛으로부터 보호되며, 예비 용액과 배양 매체는 빛으로부터 멀리 보관됩니다.
오스모틱 압력을 다시 확인하고 수식을 조정 할 때마다 한 번 측정
내독성 물질과 중금속과 같은 지표에 대한 엄격한 통제를 통해 민감한 세포에 대한 간섭을 줄이는 세포 배양 수준의 원료 선택
HEPES의 '저독성'은 상대적인 개념이고, 무제한의 여권이 아닙니다.그리고 자신의 세포에 그라디언트 검증을 수행, 독성에 대한 대부분의 질문에 명확하게 대답 할 수 있습니다.
후베이 신데?? 재료 기술 회사, Ltd는 전통적인 모델에서 지표에 맞춤 공급 방법을 제공합니다. 생물학적 완충제고객은 자신의 실험 시스템을 기반으로 순도, 금속 이온 잔류 및 UV 흡수와 같은 지표를 제안 할 수 있습니다.회사는 광구 연합 과학 기술 시에 본사를 두고 있습니다., 게디안 개발 구역, 에조우, 후베이 지방, 게디안과 후랑강에 두 개의 기지를 가지고 있습니다. 모든 범주의 연간 생산 용량은 5000 톤입니다.
