A triagem precoce de tumores, como o nome sugere, refere-se à detecção de tumores malignos em estágio inicial ou mesmo muito inicial em populações saudáveis ou de alto risco. Métodos tradicionais de triagem, como exames de imagem, muitas vezes têm dificuldade em caracterizar lesões pequenas; como padrão ouro para diagnóstico, a biópsia de tecido não pode ser usada como método de triagem em larga escala devido à sua invasividade. É neste contexto que a tecnologia de biópsia líquida entrou no campo clínico, e a solução de preservação de DNA livre é o suporte básico para garantir a aplicação prática desta tecnologia.
O código do tumor no sangue
DNA livre circulante refere-se a fragmentos de DNA altamente fragmentados que estão livres fora das células no sangue. Em um corpo humano saudável, ele vem principalmente de células normais em envelhecimento e apoptose. Mas quando um tumor ocorre, a situação muda. As células tumorais têm uma taxa de proliferação rápida e alta taxa de apoptose, liberando constantemente seu DNA na corrente sanguínea. Este DNA livre do tumor é chamado de DNA tumoral circulante.
Este tipo de DNA tumoral carrega informações de variação genética consistentes com o tumor primário, incluindo mutações, metilação, variações no número de cópias, etc. Em teoria, com apenas um tubo de sangue coletado, sinais de tumores em todo o corpo podem ser capturados. No entanto, este estado ideal enfrenta um sério desafio na realidade: o conteúdo de DNA tumoral no sangue é extremamente baixo. Especialmente em pacientes com câncer em estágio inicial, o DNA tumoral representa apenas uma proporção muito pequena do DNA livre total no plasma, às vezes até menos de um milésimo. Para extrair essas quantidades vestigiais de informação do vasto fundo de células sanguíneas, a qualidade da amostra se torna o primeiro passo para determinar o sucesso ou o fracasso.
As duas principais ameaças após a saída do corpo
Após o sangue ser separado do corpo, a amostra não está estacionária. Se não houver intervenção, dois problemas ocorrerão rapidamente. Um é a instabilidade das células sanguíneas. Após serem isolados, os glóbulos brancos nucleados no sangue gradualmente sofrem apoptose ou lise, liberando uma grande quantidade de DNA genômico. Este DNA não vem de tumores. Quando eles inundam o plasma, eles diluem os sinais tumorais já extremamente fracos como uma inundação. O segundo é o efeito de degradação das nucleases. Existem nucleases naturais no plasma, cuja função é eliminar ácidos nucleicos livres, o que pode levar à fragmentação adicional ou mesmo ao desaparecimento de valiosos fragmentos de DNA tumoral.
Tubos de coleta de sangue comuns são incapazes de resolver esses dois problemas. Em tubos de EDTA tradicionais, o sangue deve passar pela separação do plasma em poucas horas, caso contrário, a amostra 'deteriorará'. Para projetos de triagem precoce de tumores que exigem testes centralizados ou remotos, esta janela de tempo é obviamente difícil de atender às necessidades práticas.
Função tripla da solução de preservação
A solução de preservação de DNA livre é projetada para resolver os problemas mencionados anteriormente. Ela é pré-pulverizada na parede interna de um tubo de coleta de sangue dedicado e começa a funcionar a partir do momento em que o sangue flui para o tubo. Sua função principal é estabilizar as células sanguíneas. A solução de preservação contém inibidores especiais do metabolismo celular que podem agir rapidamente nos glóbulos brancos, prevenindo sua ruptura e liberação de DNA genômico. Isso é como fechar a porta para a poluição na fonte, garantindo que apenas o DNA livre original no sangue seja retido no plasma. Em segundo lugar, é proteger o DNA existente. Os componentes anti-nuclease na solução de preservação podem inibir a atividade das nucleases, fornecendo uma camada de 'proteção' para o DNA livre para evitar sua degradação. O terceiro é fornecer uma janela de transporte. A solução de preservação de alta qualidade pode manter as amostras estáveis à temperatura ambiente por até 3 a 14 dias. Isso significa que a distância geográfica entre os pontos de amostragem e os centros de detecção não é mais uma barreira, e áreas remotas também podem desfrutar de serviços de detecção homogêneos com os das cidades centrais.
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