Toepassing van HEPES-natriumzout in de fluorescentietestkit voor fluorescentieluminescentie (deel 1)

HEPES natriumzout (CAS-nummer 75277-39-3), chemische naam N-(2-hydroxyethyl)piperazine-N'-(2-ethanesulfonzuur) natriumzout, molecuulformule C8 H1 N2 NaO4 S, is een hoogwaardig zwitterionisch biologisch buffermiddel. HEPES natriumzout behoort tot de Good's bufferfamilie, met een pKa van 7,5 bij 25°C en een effectief buffereffectbereik van pH 6,8-8,2. Dit buffereffectbereik dekt precies het pH-bereik dat vereist is voor de overgrote meerderheid van de fysiologische en in vitro diagnostische reacties, waardoor het een kernelement is van buffersystemen die veel worden gebruikt op gebieden zoals celkweek, biofarmaceutica en diagnostische reagentia.

HEPES natriumzout heeft meerdere unieke fysisch-chemische voordelen: het heeft een extreem lage bindingscapaciteit voor metaalionen en bindt niet aan tweewaardige metaalionen zoals magnesium, calcium en mangaan; Hoge optische transparantie, extreem lage absorptie in zichtbare en ultraviolette gebieden, interfereert niet met fluorescentiedetectie; Lage cytotoxiciteit, superieur aan traditionele buffermiddelen zoals Tris en fosfaat; Goede temperatuurstabiliteit en minimale pH-variatie met temperatuur. Deze kenmerken geven HEPES natriumzout een onvervangbare positie in in vitro diagnostische kits die fluorescentiedetectie omvatten.

Introductie tot de Flow Fluorescentie Luminescentiemethode

Flow Fluorescentie Luminescentie Assay is een snel ontwikkelende multi-index gezamenlijke detectietechniek op het gebied van in vitro diagnostiek (IVD) in de afgelopen jaren. Vergeleken met traditionele chemiluminescente enkelvoudige detectie, kan flowcytometrische fluorescentiedetectie meerdere items tegelijkertijd detecteren en heeft het het voordeel van hoge doorvoer. Tijdens het detectieproces bepaalt de stabiliteit van het buffersysteem direct de efficiëntie van de antigeen-antilichaamreactie, de dispersietoestand van de microsferen en de intensiteit en reproduceerbaarheid van het fluorescentiesignaal.

Specifieke toepassing van HEPES natriumzout in flowcytometrische fluorescentie-assaykits

Momenteel gebruiken meerdere goedgekeurde flowcytometrische detectiekits HEPES natriumzoutbuffer als kernelement. Hier zijn twee representatieve voorbeelden:

Kits voor de detectie van plaveiselcelcarcinoomantigeen (flowcytometrische fluorescentie luminescentiemethode):

In de samenstelling van de kit bevat het met microsferen gecoate antilichamereagens (A) microsferen gecoat met SCCA (muis) antilichaam en HEPES natriumzoutbuffer; Het biotine-antilichamereagens (B) bevat gebiotinyleerde SCCA (muis) antilichamen en HEPES natriumzoutbuffer. Het product moet in het donker worden bewaard bij 2-8°C en heeft een houdbaarheid van 12 maanden.

Cytokine detectiekit (flowcytometrische fluorescentie luminescentiemethode):

Deze kit wordt voornamelijk klinisch gebruikt om de immuunstatus en ontstekingsreactie van het lichaam te monitoren. HEPES natriumzoutbuffer wordt gebruikt in meerdere componenten: Microsfeer gecoat antilichamereagens (A) bevat zes soorten gecoate antilichaammicrosferen en HEPES natriumzoutbuffer; Het biotine-antilichamereagens (B) bevat zes gebiotinyleerde antilichamen en HEPES natriumzoutbuffer; De kalibratiemonsters (CAL2-CAL6) en kwaliteitscontrolemonsters (QCL, QCH) zijn ook gebaseerd op HEPES natriumzoutbuffer.

Typische formule van HEPES natriumzout in bufferoplossing

In praktische toepassingen wordt HEPES natriumzout vaak gecombineerd met andere componenten om een ​​compleet buffersysteem te construeren. De buffer die wordt gebruikt voor flowcytometrische fluorescentiedetectie omvat meestal een basisbuffer, een oppervlakteactieve stof en een conserveermiddel; De basisbuffer omvat één of meer van Tris-buffer, MES-buffer, CBS-buffer, PBS-buffer en HEPES-buffer. De concentratie van opgeloste stoffen in de basisbuffer is over het algemeen 50-100 mM, en de pH-waarde is 7,3-7,5.

In de klassieke toepassingen van flowcytometrie en fluorescentiedetectie omvatten veelvoorkomende formuleringen van HEPES-buffer: 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0,05% Tween 20, pH 7,0; Of 10 mM HEPES, 136 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 2 mM MgCl2, 5,5 mM glucose, 0,1% BSA, pH 7,35.

Uitgaande van de fysisch-chemische eigenschappen van HEPES natriumzout, introduceert dit artikel systematisch de specifieke toepassingsscenario's in flowcytometrische fluorescentie-assaykits. Het volgende artikel zal dieper ingaan op de kerntechnologische voordelen van HEPES natriumzout in flowcytometrische fluorescentiedetectie vanuit de dimensies van pH-buffereffectbereik, metaalionchelatie, optische transparantie, chemische inertheid en cytotoxiciteit. Op basis van de gemeten indicatoren van New Desheng HEPES natriumzoutproducten, zullen belangrijke parameters en inkoopadviezen voor grondstofselectie worden verstrekt, wat een referentie biedt voor grondstofselectie en kwaliteitscontrole van reagentia-kitproductiebedrijven.