Aplicação do sal de sódio HEPES no kit de ensaio de luminescência por fluorescência de fluxo (parte 1)

Sal de sódio HEPES (número CAS 75277-39-3), denominação química N - (2-hidroxietil) piperazina-N '- (2-ácido etilsulfónico) sal de sódio, fórmula molecular C₈H₁N₂NaO₄O sal de sódio HEPES pertence à família dos tampões do Good, com um pKa de 7,5 a 25°Ce uma gama de amortecimento eficaz de pH 6,8-8.2Este intervalo tampão cobre precisamente o intervalo de pH necessário para a grande maioria das reacções fisiológicas e de diagnóstico in vitro.tornando-se um componente central de sistemas tampão amplamente utilizados em campos como cultura celular, biofarmacêuticos e reagentes de diagnóstico.

HEPES sódioO sal tem várias vantagens físico-químicas únicas: tem uma capacidade de ligação extremamente baixa com íons metálicos e não se liga a íons metálicos bivalentes, como magnésio, cálcio e manganês;Alta transparência óptica, absorção extremamente baixa nas regiões visível e ultravioleta, não interfere na detecção da fluorescência; baixa citotoxicidade, superior aos agentes tampões tradicionais como Tris e fosfato;Boa estabilidade de temperatura e variação mínima do pH com a temperaturaEstas características dão ao sal sódico HEPES uma posição insubstituível nos kits de diagnóstico in vitro que envolvem a detecção por fluorescência.

Introdução ao Método de Luminescência por Fluorescência de Fluxo

O ensaio de luminescência por fluorescência de fluxo é uma técnica de detecção de articulações multiíndice de rápido desenvolvimento no campo do diagnóstico in vitro (IVD) nos últimos anos.Em comparação com a detecção de elementos únicos por quimioluminescência tradicional, a detecção de fluorescência por citometria de fluxo pode detectar simultaneamente múltiplos itens e tem a vantagem de um elevado rendimento.a estabilidade do sistema tampão determina diretamente a eficiência da reação do anticorpo do antígeno, o estado de dispersão das microesferas e a intensidade e reprodutibilidade do sinal de fluorescência.

Aplicação específica do sal de sódio HEPES no kit de ensaio de fluorescência por citometria de fluxo

Atualmente, vários kits de detecção de citometria de fluxo aprovados usam tampão de sal sódico HEPES como componente principal.

Kit de detecção de antígenos do carcinoma de células escamosas (método de fluorescência fluorescente de citometria de fluxo):

Na composição do kit, o reagente de anticorpo revestido com microsfera (A) inclui microsferas revestidas com anticorpo SCCA (de rato) e tampão de sal de sódio HEPES;O reagente de anticorpos à biotina (B) contém anticorpos SCCA biotinilados (de rato) e tampão de sal sódico HEPESO produto deve ser conservado no escuro a 2- 8 °C.°Ce tem uma vida útil de 12 meses.

Kit de detecção de citocinas (método de fluorescência por fluorescência de citometria de fluxo):

Este kit é usado principalmente clinicamente para monitorar o estado imunológico e a resposta inflamatória do corpo.Reagente de anticorpo revestido com microsfera (A) contém seis tipos de microsferas de anticorpos revestidas e tampão de sal de sódio HEPESOs amostras de calibração (CAL2-CAL6) e as amostras de controlo de qualidade (QCL),QCH) também se baseiam no tampão de sal sódico HEPES.

Fórmula típica de sal sódico HEPES em solução tampão

Em aplicações práticas, o sal de sódio HEPES é frequentemente usado em combinação com outros componentes para construir um sistema tampão completo.O tampão utilizado para a detecção de fluorescência por citometria de fluxo geralmente inclui um tampão base, um tensoactivo e um conservante; O tampão básico inclui um ou mais tampões Tris, MES, CBS, PBS e HEPES.A concentração de solutos no amortecedor básico é geralmente de 50 a 100 mM, e o valor do pH é 7,3-7.5.

Nas aplicações clássicas de citometria de fluxo e detecção por fluorescência, as formulações comuns do tampão HEPES incluem: 10mM HEPES, 150mM NaCl, 3mM EDTA, 0,05% Tween 20, pH 7.0Ou 10mM HEPES, 136mM NaCl, 2,7mM KCl, 2mM MgCl₂, 5,5 mM de glicose, 0, 1% BSA, pH 7.35.

Partindo das propriedades fisicoquímicas do sal sódico HEPES, este artigo apresenta sistematicamente os seus cenários de aplicação específicos em kits de ensaio de fluorescência de citometria de fluxo.O próximo artigo aprofundará as principais vantagens tecnológicas do sal sódico HEPES na detecção de fluorescência por citometria de fluxo a partir das dimensões da faixa de tampão de pHCom base nos indicadores medidos dos produtos de sal de sódio HEPES de New Desheng,Serão fornecidos parâmetros-chave e sugestões de aquisição para a seleção de matérias-primas, fornecendo referência para a selecção de matérias-primas e controlo de qualidade das empresas de produção de kits de reagentes.