Applicazione del sale di sodio HEPES nel kit di prova di fluorescenza (parte 1)

Sale di sodio dell'HEPES (numero CAS 75277-39-3), nome chimico sale sodico dell'acido N-(2-idrossietil)piperazina-N'-(2-etansolfonico), formula molecolare CHNNaOS, è un agente tampone biologico zwitterionico di alta qualità. Il sale sodico dell'HEPES appartiene alla famiglia dei tamponi di Good, con un pKa di 7,5 a 25°CIl sale sodico dell'HEPES presenta molteplici vantaggi fisico-chimici unici: ha un'attività di legame estremamente bassa con gli ioni metallici e non si lega a ioni metallici bivalenti come magnesio, calcio e manganese; elevata trasparenza ottica, assorbimento estremamente basso nelle regioni visibile e ultravioletta, non interferisce con il rilevamento a fluorescenza; bassa citotossicità, superiore agli agenti tampone tradizionali come Tris e fosfato; buona stabilità termica e minima variazione di pH con la temperatura. Queste caratteristiche conferiscono al sale sodico dell'HEPES una posizione insostituibile nei kit diagnostici in vitro che coinvolgono il rilevamento a fluorescenza.Introduzione al metodo a fluorescenza a flussoIl saggio a fluorescenza a flusso è una tecnica di rilevamento congiunto multi-indice in rapido sviluppo nel campo della diagnostica in vitro (IVD) negli ultimi anni. Rispetto al rilevamento singolo elemento della chemiluminescenza tradizionale, il rilevamento a fluorescenza mediante citometria a flusso può rilevare contemporaneamente più elementi e presenta il vantaggio di un'elevata produttività. Durante il processo di rilevamento, la stabilità del sistema tampone determina direttamente l'efficienza della reazione antigene-anticorpo, lo stato di dispersione delle microsfere e l'intensità e la riproducibilità del segnale di fluorescenza.Nelle applicazioni pratiche, il sale sodico dell'HEPES viene spesso utilizzato in combinazione con altri componenti per costruire un sistema tampone completo. Il tampone utilizzato per il rilevamento a fluorescenza mediante citometria a flusso include solitamente un tampone di base, un tensioattivo e un conservante; il tampone di base include uno o più tra tampone Tris, tampone MES, tampone CBS, tampone PBS e tampone HEPES. La concentrazione dei soluti nel tampone di base è generalmente di 50-100 mM e il valore di pH è di 7,3-7,5.Attualmente, numerosi kit di rilevamento mediante citometria a flusso approvati utilizzano il tampone di sale sodico dell'HEPES come componente principale. Di seguito sono riportati due esempi rappresentativi:

Kit di rilevamento dell'antigene del carcinoma a cellule squamose (metodo a fluorescenza a flusso):

Nella composizione del kit, il reagente anticorpo-microsfera rivestita (A) include microsfere rivestite con anticorpo anti-SCCA (topo) e tampone di sale sodico dell'HEPES; il reagente anticorpo-biotina (B) contiene anticorpi anti-SCCA (topo) biotinilati e tampone di sale sodico dell'HEPES. Il prodotto deve essere conservato al buio a 2-8

°C

e ha una durata di conservazione di 12 mesi.

Kit di rilevamento delle citochine (metodo a fluorescenza a flusso)

:Partendo dalle proprietà fisico-chimiche del sale sodico dell'HEPES, questo articolo introduce sistematicamente i suoi scenari applicativi specifici nei kit di saggio a fluorescenza mediante citometria a flusso. Il prossimo articolo approfondirà i vantaggi tecnologici fondamentali del sale sodico dell'HEPES nel rilevamento a fluorescenza mediante citometria a flusso dalle dimensioni dell'intervallo di tamponamento del pH, della chelazione degli ioni metallici, della trasparenza ottica, dell'inerzia chimica e della citotossicità. Sulla base degli indicatori misurati dei prodotti a sale sodico HEPES di New Desheng, verranno forniti parametri chiave e suggerimenti per l'approvvigionamento per la selezione delle materie prime, fornendo un riferimento per la selezione delle materie prime e il controllo di qualità delle imprese di produzione di kit di reagenti.

Formula tipica del sale sodico dell'HEPES in soluzione tamponeNelle applicazioni pratiche, il sale sodico dell'HEPES viene spesso utilizzato in combinazione con altri componenti per costruire un sistema tampone completo. Il tampone utilizzato per il rilevamento a fluorescenza mediante citometria a flusso include solitamente un tampone di base, un tensioattivo e un conservante; il tampone di base include uno o più tra tampone Tris, tampone MES, tampone CBS, tampone PBS e tampone HEPES. La concentrazione dei soluti nel tampone di base è generalmente di 50-100 mM e il valore di pH è di 7,3-7,5.Nelle applicazioni classiche della citometria a flusso e del rilevamento a fluorescenza, le formulazioni comuni del tampone HEPES includono: 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0,05% Tween 20, pH 7,0; oppure 10 mM HEPES, 136 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 2 mM MgCl

, 5,5 mM glucosio, 0,1% BSA, pH 7,35.Partendo dalle proprietà fisico-chimiche del sale sodico dell'HEPES, questo articolo introduce sistematicamente i suoi scenari applicativi specifici nei kit di saggio a fluorescenza mediante citometria a flusso. Il prossimo articolo approfondirà i vantaggi tecnologici fondamentali del sale sodico dell'HEPES nel rilevamento a fluorescenza mediante citometria a flusso dalle dimensioni dell'intervallo di tamponamento del pH, della chelazione degli ioni metallici, della trasparenza ottica, dell'inerzia chimica e della citotossicità. Sulla base degli indicatori misurati dei prodotti a sale sodico HEPES di New Desheng, verranno forniti parametri chiave e suggerimenti per l'approvvigionamento per la selezione delle materie prime, fornendo un riferimento per la selezione delle materie prime e il controllo di qualità delle imprese di produzione di kit di reagenti.