Aplicación de la sal de sodio HEPES en el kit de ensayo de fluorescencia por luminiscencia de flujo (parte 1)

Sal sódica de HEPES (número CAS 75277-39-3), nombre químico Sal sódica de N - (2-hidroxietil) piperazina-N'- (ácido 2-etilsulfónico), fórmula molecular C₈h₁norte₂NaO₄S, es un agente tampón biológico zwitteriónico de alta calidad. La sal sódica de HEPES pertenece a la familia de tampones de Good, con un pKa de 7,5 a 25℃y un rango de amortiguación eficaz de pH 6,8-8,2. Esta gama de tampones cubre con precisión el rango de pH necesario para la gran mayoría de reacciones de diagnóstico fisiológico e in vitro, lo que lo convierte en un componente central de los sistemas de tampón ampliamente utilizados en campos como el cultivo celular, los productos biofarmacéuticos y los reactivos de diagnóstico.

HEPES sodiola sal tiene múltiples ventajas fisicoquímicas únicas: tiene una capacidad de unión extremadamente baja a iones metálicos y no se une a iones metálicos divalentes como magnesio, calcio y manganeso; La alta transparencia óptica y la absorción extremadamente baja en las regiones visible y ultravioleta no interfieren con la detección de fluorescencia; Baja citotoxicidad, superior a los agentes tampón tradicionales como Tris y fosfato; Buena estabilidad de la temperatura y mínima variación del pH con la temperatura. Estas características otorgan a la sal sódica de HEPES una posición insustituible en los kits de diagnóstico in vitro que implican detección de fluorescencia.

Introducción al método de luminiscencia de fluorescencia de flujo

El ensayo de luminiscencia de fluorescencia de flujo es una técnica de detección de articulaciones de múltiples índices que se está desarrollando rápidamente en el campo del diagnóstico in vitro (IVD) en los últimos años. En comparación con la detección tradicional de un solo elemento por quimioluminiscencia, la detección de fluorescencia por citometría de flujo puede detectar simultáneamente varios elementos y tiene la ventaja de un alto rendimiento. Durante el proceso de detección, la estabilidad del sistema tampón determina directamente la eficiencia de la reacción antígeno-anticuerpo, el estado de dispersión de las microesferas y la intensidad y reproducibilidad de la señal de fluorescencia.

Aplicación específica de la sal sódica de HEPES en el kit de ensayo de fluorescencia por citometría de flujo

Actualmente, varios kits de detección de citometría de flujo aprobados utilizan el tampón de sal sódica HEPES como componente principal. Aquí hay dos ejemplos representativos:

Kit de detección de antígenos del carcinoma de células escamosas (método de luminiscencia de fluorescencia por citometría de flujo):

En la composición del kit, el reactivo de anticuerpo recubierto con microesferas (A) incluye microesferas recubiertas con anticuerpo SCCA (ratón) y tampón de sal sódica HEPES; El reactivo de anticuerpos de biotina (B) contiene anticuerpos SCCA (ratón) biotinilados y tampón de sal sódica HEPES. El producto debe almacenarse en la oscuridad entre 2 y 8℃y tiene una vida útil de 12 meses.

Kit de detección de citoquinas (método de luminiscencia de fluorescencia por citometría de flujo):

Este kit se utiliza principalmente clínicamente para controlar el estado inmunológico y la respuesta inflamatoria del cuerpo. El tampón de sal sódica HEPES se utiliza en varios componentes: el reactivo de anticuerpo recubierto con microesferas (A) contiene seis tipos de microesferas de anticuerpo recubiertas y el tampón de sal sódica HEPES; El reactivo de anticuerpos de biotina (B) contiene seis anticuerpos biotinilados y tampón de sal sódica HEPES; Las muestras de calibración (CAL2-CAL6) y las muestras de control de calidad (QCL, QCH) también se basan en el tampón de sal sódica HEPES.

Fórmula típica de sal sódica de HEPES en solución tampón

En aplicaciones prácticas, la sal sódica de HEPES se utiliza a menudo en combinación con otros componentes para construir un sistema tampón completo. El tampón utilizado para la detección de fluorescencia por citometría de flujo suele incluir un tampón base, un tensioactivo y un conservante; El buffer básico incluye uno o más de buffer Tris, buffer MES, buffer CBS, buffer PBS y buffer HEPES. La concentración de solutos en el tampón básico es generalmente de 50 a 100 mM y el valor del pH es de 7,3 a 7,5.

En las aplicaciones clásicas de citometría de flujo y detección de fluorescencia, las formulaciones comunes de tampón HEPES incluyen: HEPES 10 mM, NaCl 150 mM, EDTA 3 mM, Tween 20 al 0,05 %, pH 7,0; O HEPES 10 mM, NaCl 136 mM, KCl 2,7 mM, MgCl 2 mM₂, glucosa 5,5 mM, BSA al 0,1 %, pH 7,35.

A partir de las propiedades fisicoquímicas de la sal sódica de HEPES, este artículo presenta sistemáticamente sus escenarios de aplicación específicos en kits de ensayo de fluorescencia por citometría de flujo. El próximo artículo profundizará en las principales ventajas tecnológicas de la sal sódica de HEPES en la detección de fluorescencia por citometría de flujo desde las dimensiones del rango de tampón de pH, quelación de iones metálicos, transparencia óptica, inercia química y citotoxicidad. Con base en los indicadores medidos de los productos de sal de sodio HEPES de New Desheng, se proporcionarán parámetros clave y sugerencias de adquisición para la selección de materias primas, proporcionando referencia para la selección de materias primas y el control de calidad de las empresas de producción de kits de reactivos.