Belangrijke controle van de zuivering van Tris HCl buffer eiwitten

Bij eiwitzuiveringsproeven is de keuze van de buffer belangrijk, maar het kiezen van de juiste buffer betekent niet noodzakelijkerwijs dat het experiment succesvol zal zijn.de controle van de bufferconcentratie, temperatuur, zout-ionsterkte en andere omstandigheden beïnvloeden ook het zuivereffect. Tris HClis een van de meest gebruikte proteïne zuivering buffer systemen, en er zijn meerdere beheersstappen die moeten worden meegewogen tijdens het gebruik.

Bepaling van de bufferconcentratie

Tris HCl moet een effectieve bufferrol spelen, en concentratie is een fundamentele voorwaarde.alleen afhankelijk zijn van het bufferbereik is niet voldoendeAls de concentratie te laag is, is de hoeveelheid zuur-basisveranderingen die in het systeem kunnen worden opgenomen beperkt en onvoldoende om de pH-afwijking te weerstaan die tijdens de eiwitzuivering kan optreden..Bij eiwitzuiveringsproeven wordt de werkconcentratie van Tris HCl gewoonlijk geselecteerd tussen 20 en 100 millimole per liter.Buiten dit bereik., kan een overmatige ionsterkte worden ingevoerd, waardoor de interactie tussen het eiwit en het chromatografisch medium wordt beïnvloed.De specifieke concentratie moet worden aangepast aan de zuiveringsmethode en de eiwitkenmerken..

Het effect van temperatuur op de pH-waarde

Tris-HCl-buffer is gevoelig voor temperatuurveranderingen, wat een van de meest gemakkelijke controlevoorwaarden is die bij het gebruik ervan wordt over het hoofd gezien.dus de pH-waarde bij één temperatuur zal verschuiven bij een andere temperatuurBijvoorbeeld in een bufferoplossing die bij 25 graden Celsius is aangepast op pH 8,0 stijgt de pH eigenlijk tot ongeveer 8,58 wanneer de temperatuur daalt tot 5 graden Celsius en daalt tot ongeveer 7.71 wanneer de temperatuur stijgt tot 37 graden CelsiusAls in het laboratorium eiwitmonsters bij 4 graden Celsius worden opgeslagen en bufferoplossingen worden bereid en de pH bij kamertemperatuur wordt aangepast, is er een significante afwijking tussen de twee.De pH-waarde van de bufferoplossing moet worden aangepast aan de werkelijke temperatuur die in het experiment wordt gebruikt., of vooraf aangepast volgens de temperatuurcorrectiecoëfficiënt.

Controle van de concentratie van zout ionen

Tris HCl buffer gebruikt in eiwit zuivering experimenten vereist meestal de toevoeging van natriumchloride om de ionsterkte aan te passen. de toevoeging van zout heeft meerdere doeleinden:het verhogen van de ionensterkte helpt de oplosbaarheid van eiwitten te behouden en vermindert de verliezen veroorzaakt door eiwitaggregatieTegelijkertijd bevindt het zich onder fysiologische omstandigheden ook dichter bij de ionenomgeving, wat de natuurlijke conformatie van het eiwit bevordert.De algemeen gebruikte concentratie natriumchloride is ongeveer 150 millimole per liter, maar het kan nodig zijn om deze in verschillende zuiveringsstappen aan te passen.

Bij ionenwisselingschromatografie is in de beginfase een lagere zoutconcentratie vereist om de competitieve binding te verminderen en het doelproteïne effectief op het medium te adsorberen;In de elutiefaseIn de gelfiltratiechromatografie wordt het doelproteïne competitief verplaatst door de zoutconcentratie via een gradiënt te verhogen.een geschikte zoutconcentratie kan bijdragen tot vermindering van de niet-specifieke adsorptie en verbetering van het scheidingseffectBij nikkel-ion-affiniteitschromatografie moeten de zoutconcentraties van de evenwichtsbuffer en de wasbuffer ook redelijkerwijs worden gecontroleerd om de niet-specifieke binding van onzuiverheden te verminderen.

Vermijd interferentie door fosfaten

De samenstelling van Tris HCl-buffer is relatief eenvoudig, maar het is belangrijk dat tijdens het gebruik niet-compatibele componenten worden ingevoerd.en de activiteit van bepaalde eiwitten (zoals kinasen) kan worden geremd door fosfatenAls er fosfaat in het monster of in de buffer wordt gemengd, moet het grondig worden verwijderd door dialyse of door de buffer te vervangen voordat de zuivering begint.het water dat wordt gebruikt om Trispoeder op te lossen en de reagentia die worden gebruikt om de buffer voor te bereiden, moeten de kwaliteit waarborgen en verontreinigingen vermijden die het zuiveringssysteem verstoren..

Tris HCl is een volwassen en veelgebruikt buffersysteem voor de zuivering van eiwitten, maar de effectiviteit ervan is afhankelijk van een redelijke controle van de concentratie, temperatuur en zout-ionsterkte.Alleen wanneer deze omstandigheden goed worden behandeld, kan Tris HCl zijn bufferfunctie uitoefenen en een stabiele milieugarantie bieden voor eiwitzuiveringHubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. kan verschillendebiologische bufferactiesDe Commissie is van mening dat de in de eerste plaats door de Commissie voorgestelde maatregelen in overeenstemming zijn met het beginsel van gelijke behandeling.