タンパク質浄化実験では,バッファの選択は重要ですが,適切なバッファを選択すると必ずしも実験が成功するとは限りません.バッファーの濃度の制御温度,塩離子強度,その他の条件も浄化効果に影響します. トリスHCl最もよく使われるタンパク質浄化バッファシステムの一つであり,使用中に考慮する必要がある複数の制御ステップがあります.
バッファーの濃度決定
Tris HClは効果的なバッファリング役割を果たし 濃度は基本的な条件ですバッファリング範囲だけに頼るだけでは不十分です濃度が低すぎると,タンパク質浄化中に発生するpH変動に抵抗するには,システムに収納できる酸塩基変化の量は限られており,不十分です..タンパク質浄化実験では,Tris HClの作業濃度は通常,1リットルあたり20〜100ミリモールで選択される.この範囲以下では,バッファ容量は不十分である可能性があります.この範囲を超えてタンパク質と染色体介質の相互作用に影響を与える.特定濃度の選択は,浄化方法とタンパク質の特性に応じて調整する必要があります..
pH 値 に 対する 温度 の 影響
Tris HCl バッファーは温度変化に敏感で,使用する際に最も簡単に見過ごされる制御条件の1つです.pH値は別の温度で変化します.例えば 25°Cで pH 8.0 に調整されたバッファ溶液では,温度が 5°C に下がると pH が実際に 8.58 に上昇し, 7 程度に低下します.温度が37°Cまで上昇すると実験室でタンパク質サンプルを摂氏4°Cで保存し,バッファ溶液を準備し,室温でpHを調整すると,両者の間には大きな偏差がある.実用的な作業では,試験で使用された実際の温度でバッファ溶液のpH値を調整する.温度調整係数に従って調整される.
塩イオン濃度の制御
タンパク質浄化実験で使用されるTris HClバッファは,通常,イオン強度を調整するために塩化ナトリウムが加わることが必要です.塩を加えるには複数の目的があります:イオン強度を増やすことで,タンパク質の溶解性を維持し,タンパク質集積による損失を軽減します身体的条件下では,イオン環境にも近いため,タンパク質の自然な構成を維持することが可能である.一般 に 用いる 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化 塩化異なる浄化段階で調整する必要があるかもしれません.
イオン交換色素学では,競争結合を減少させ,標的タンパク質を媒体に効果的に吸収するために,初期段階では塩濃度が低いことが必要である.エルーション段階ゲルフィルタリング染色体学では,塩分濃度をグラデントで増加させることで,標的タンパク質が競争的に置き去りにされる.適切な塩濃度は,非特異的な吸収を減少させ,分離効果を改善するのに役立ちます.ニッケルイオン親和色素学では,不純物の非特異結合を減らすために,均衡バッファと洗浄バッファの塩濃度も合理的に制御する必要があります.
リン酸塩の干渉を避ける
Tris HCl バッファーの組成は比較的単純ですが,使用中に不適合な成分を導入しないことが重要です.リン酸塩によって抑制される可能性があります.検体またはバッファにフォスファートが混入されている場合は,浄化開始前に透析によって徹底的に除去するか,バッファーを交換する必要があります.トリス粉末を溶かすために使用された水とバッファを準備するために使用された試料は品質を保証し,浄化システムに干渉する汚れを避けるべきである..
Tris HClは,タンパク質浄化において成熟し広く使用されているバッファシステムですが,その有効性は濃度,温度,塩離子強度を合理的に制御することに依存します.これらの条件が適切に処理されたときのみ,Tris HClはバッファ機能を行使し,タンパク質浄化の安定した環境保証を提供します.Hubei Xindesheng 材料技術株式会社生物学的バッファ剤Tris,Bicine,MOPSなどで 異なる浄化システムのニーズを満たします
