Dans les expériences de purification des protéines, le choix du tampon est important, mais la sélection du bon tampon ne signifie pas nécessairement que l'expérience aura du succès.le contrôle de la concentration du tampon, la température, la résistance des ions salins et d'autres conditions influent également sur l'effet de purification. Tris HClest l'un des systèmes tampons de purification des protéines les plus couramment utilisés, et il existe plusieurs étapes de contrôle qui doivent être prises en compte lors de son utilisation.
Détermination de la concentration du tampon
Bien que la constante de dissociation de Tris pKa ait une capacité de tampon près du pH cible,Il ne suffit pas de compter uniquement sur la plage de tamponnage.Si la concentration est trop faible, la quantité de changements acido-basiques qui peuvent être accommodés dans le système est limitée et insuffisante pour résister à la dérive de pH qui peut survenir pendant la purification des protéines..Dans les expériences de purification des protéines, la concentration de travail de Tris HCl est généralement sélectionnée entre 20 et 100 millimoles par litre.Au-delà de cette plage, une résistance ionique excessive peut être introduite, affectant l'interaction entre la protéine et le milieu de chromatographie.La sélection de la concentration spécifique doit être ajustée en fonction de la méthode de purification et des caractéristiques des protéines..
L'effet de la température sur la valeur du pH
Le tampon Tris HCl est sensible aux changements de température, ce qui est l'une des conditions de contrôle les plus facilement négligées dans son utilisation.donc la valeur du pH ajustée à une température changera à une autre températurePar exemple, dans une solution tampon ajustée à un pH de 8,0 à 25 degrés Celsius, le pH augmente en fait à environ 8,58 lorsque la température descend à 5 degrés Celsius, et diminue à environ 7.71 lorsque la température monte à 37 degrés CelsiusSi le laboratoire stocke des échantillons de protéines à 4 degrés Celsius et prépare des solutions tampons et ajuste le pH à température ambiante, il y a un écart significatif entre les deux.la valeur de pH de la solution tampon doit être ajustée à la température réelle utilisée dans l'expérience, ou préajusté en fonction du coefficient de correction de température.
Contrôle de la concentration en ions salins
Le tampon Tris HCl utilisé dans les expériences de purification des protéines nécessite généralement l'ajout de chlorure de sodium pour ajuster la résistance des ions.augmentation de la résistance ionique aide à maintenir la solubilité des protéines et réduit les pertes causées par l'agrégation des protéinesEn même temps, il est également plus proche de l'environnement ionique dans des conditions physiologiques, ce qui permet de maintenir la conformation naturelle de la protéine.La concentration couramment utilisée de chlorure de sodium est d'environ 150 millimoles par litre, mais il peut être nécessaire de l'ajuster en différentes étapes de purification.
Dans la chromatographie par échange ionique, une concentration de sel inférieure est requise au stade initial pour réduire la liaison concurrentielle et adsorber efficacement la protéine cible sur le milieu;Au stade d'élution, la protéine cible est déplacée de manière compétitive en augmentant la concentration de sel à travers un gradient.une concentration appropriée de sel peut aider à réduire l'adsorption non spécifique et à améliorer l'effet de séparationDans la chromatographie d'affinité des ions nickel, les concentrations de sel du tampon d'équilibre et du tampon de lavage doivent également être raisonnablement contrôlées pour réduire la liaison non spécifique des impuretés.
Évitez les interférences des phosphates
La composition du tampon Tris HCl est relativement simple, mais il est important d'éviter l'introduction de composants incompatibles pendant l'utilisation.et l'activité de certaines protéines (telles que les kinases) peut être inhibée par les phosphatesSi le phosphate est mélangé à l'échantillon ou au tampon, il doit être complètement éliminé par dialyse ou par changement de tampon avant le début de la purification.l'eau utilisée pour dissoudre la poudre de Tris et les réactifs utilisés pour préparer le tampon doivent assurer la qualité et éviter les impuretés interférant avec le système de purification..
Le Tris HCl est un système tampon mature et largement utilisé dans la purification des protéines, mais son efficacité dépend d'un contrôle raisonnable de la concentration, de la température et de la résistance des ions de sel.Ce n'est que lorsque ces conditions sont correctement traitées que le Tris HCl peut exercer sa fonction de tampon et fournir une garantie environnementale stable pour la purification des protéines.Hubei Xindesheng Materials Technology Co., Ltd. peut fournir une variété de produits.agents de tamponnage biologiquesIl s'agit d'un système de purification de l'air qui permet d'utiliser des produits tels que Tris, Bicine, MOPS, etc. pour répondre aux besoins de différents systèmes de purification.
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