Analyse van de noodzaak van sterilisatie met een biologische bufferoplossing

In biologische experimenten is buffervloeistof bijna een onmisbaar basisreagens voor elk experimenteel plan. Moeten Tris, HEPES, MOPS en andere biologische buffermiddelen na bereiding tot een oplossing worden gesteriliseerd? Het antwoord is niet te generaliseren. Er zijn significante verschillen in de noodzaak van sterilisatie voor verschillende soorten experimenten en gebruiksscenario's.

Doel en feitelijke functie van sterilisatie

Het hoofddoel van sterilisatiebehandeling is het verwijderen van micro-organismen en hun metabolieten uit de oplossing, waardoor wordt voorkomen dat de buffer tijdens opslag en gebruik wordt gecontamineerd door bacteriën of schimmels. Voor reserveoplossingen die langdurige conservering vereisen, kan sterilisatie hun houdbaarheid verlengen en pH-drift of componentdegradatie veroorzaakt door microbiële groei verminderen. Sterilisatie is echter niet van toepassing op alle scenario's, en de noodzaak van sterilisatie moet worden bepaald op basis van de vereisten van het experiment zelf voor steriele omstandigheden en het gebruik van buffervloeistoffen.

Voorgestelde sterilisatiebehandeling voor reserveoplossing

Tris is een van de meest gebruikte buffermiddelen in biologische experimenten. Laboratoria bereiden vaak grote volumes en hoge concentraties Tris-voorraadoplossingen, zoals geconcentreerde oplossingen met 1,5 mol per liter en een pH van ongeveer 12. Indien nodig wordt een bepaald volume reserveoplossing genomen, een geschikte hoeveelheid geconcentreerd zoutzuur toegevoegd om de pH aan te passen aan de doel-pH, en na het bereiken van een bepaald volume kan deze worden gebruikt. Voor dit type reserveoplossing dat langdurige opslag vereist, wordt sterilisatie aanbevolen. Tijdens herhaaldelijk gebruik van reserveoplossing, indien deze niet wordt gesteriliseerd, kan microbiële contaminatie worden geïntroduceerd. Naarmate de opslagtijd langer wordt, kan microbiële stofwisseling de pH van de oplossing veranderen of storende stoffen produceren. Voor commerciële kant-en-klare buffervloeistoffen die een nauwkeurige concentratie vereisen, zijn constante volume en sterilisatie noodzakelijke productieprocessen.

Sommige experimenten vereisen geen sterilisatie

Trisbuffer, CAPS, MOPS, enz. zijn veelgebruikte buffersystemen in Western blot-experimenten. De operationele omgeving voor dergelijke experimenten valt meestal niet binnen het bereik van steriele operaties, en de elektroforese- en membraantransferprocessen zelf vereisen geen steriele toestand. Zelfs als de buffervloeistof wordt gesteriliseerd, is het moeilijk om de elektroforesetank, transferplaat, filterpapier en andere apparatuur die tijdens de operatie wordt gebruikt volledig steriel te maken, dus de praktische betekenis van het afzonderlijk steriliseren van de buffervloeistof is beperkt. Voor dergelijke experimenten is sterilisatie van buffervloeistof geen noodzakelijke stap. Wat meer aandacht verdient, is de nauwkeurigheid en versheid van de bufferbereiding, in plaats van de steriele toestand.

Flexibel omgaan met gebruiksmodus

Of de buffervloeistof moet worden gesteriliseerd, kan vanuit de volgende perspectieven worden beoordeeld: als de buffervloeistof binnen korte tijd na bereiding wordt opgebruikt en het gebruiksscenario geen celkweek of aseptische operaties omvat, is sterilisatie niet vereist; Als de buffervloeistof langdurig moet worden opgeslagen of herhaaldelijk moet worden hergebruikt, wordt sterilisatie aanbevolen om de houdbaarheid te verlengen; Als het experiment duidelijke vereisten heeft voor steriele omstandigheden, zoals celkweekgerelateerde experimenten, moeten de buffervloeistof en alle contactreagentia op een geschikte manier worden gesteriliseerd; Als buffervloeistof wordt gebruikt voor de productie van commerciële reagentia-kits, maken sterilisatie en anticorrosieve maatregelen deel uit van kwaliteitscontrole.

Selectie van sterilisatiemethoden

Voor buffervloeistoffen die sterilisatie vereisen, zijn veelvoorkomende methoden hogedrukstoomsterilisatie en filtratiesterilisatie. Hogedrukstoomsterilisatie is geschikt voor hittebestendige buffervloeistoffen, maar er moet worden opgemerkt dat hoge temperaturen de pH van bepaalde buffervloeistoffen kunnen beïnvloeden. Na sterilisatie moet de pH opnieuw worden gekalibreerd bij de experimentele temperatuur. Filtratiesterilisatie is geschikt voor buffervloeistoffen die thermisch instabiel zijn of bij hoge temperaturen gemakkelijk worden afgebroken. Micro-organismen worden verwijderd via een 0,22-micron filtermembraan, wat weinig invloed heeft op de samenstelling van de buffervloeistof. De keuze van de methode hangt af van de chemische eigenschappen en gebruiksvereisten van de buffervloeistof.

Of biologische buffers moeten worden gesteriliseerd, hangt af van het type experiment, de gebruiksmethode en de opslagvereisten. Tris en andere reserveoplossingen worden aanbevolen om te worden gesteriliseerd om hun houdbaarheid te verlengen, terwijl buffers die worden gebruikt in routinematige biochemische experimenten zoals eiwitblotting geen sterilisatie vereisen. Desheng kan verschillende biologische buffermaterialen leveren, zoals Tris, Bicine, HEPES, MOPS, enz. om te voldoen aan de buffereisen van verschillende experimentele scenario's. Gebruikers moeten kiezen of de bereide buffervloeistof moet worden gesteriliseerd op basis van hun eigen experimentele omstandigheden.