Análise da necessidade de esterilização com solução tampão biológica

Em experimentos biológicos, a solução tampão é um reagente básico quase indispensável para todo plano experimental. Tris, HEPES, MOPS e outros agentes tampão biológicos precisam ser esterilizados após serem preparados em solução? A resposta não é uma generalização. Existem diferenças significativas na necessidade de esterilização para diferentes tipos de experimentos e cenários de uso.

Propósito e função real da esterilização

O principal objetivo do tratamento de esterilização é remover microrganismos e seus metabólitos da solução, evitando que o tampão seja contaminado por bactérias ou fungos durante o armazenamento e uso. Para soluções de reserva que requerem preservação a longo prazo, a esterilização pode estender sua vida útil e reduzir a deriva do pH ou a degradação de componentes causada pelo crescimento microbiano. No entanto, a esterilização não é aplicável a todos os cenários, e determinar se a esterilização é necessária deve ser baseado nos requisitos do próprio experimento para condições estéreis e no uso de soluções tampão.

Tratamento de esterilização sugerido para solução de reserva

O Tris é um dos agentes tampão mais amplamente utilizados em experimentos biológicos. Laboratórios frequentemente preparam grandes volumes e altas concentrações de soluções estoque de Tris, como soluções concentradas com 1,5 moles por litro e um pH de aproximadamente 12. Quando necessário, retira-se um certo volume de solução de reserva, adiciona-se uma quantidade apropriada de ácido clorídrico concentrado para ajustar ao pH alvo e, após atingir um certo volume, pode ser utilizado. Para este tipo de solução de reserva que requer armazenamento a longo prazo, recomenda-se esterilizá-la. Durante o uso repetido da solução de reserva, se não for esterilizada, pode ser introduzida contaminação microbiana. Com o prolongamento do tempo de armazenamento, o metabolismo microbiano pode alterar o pH da solução ou produzir substâncias interferentes. Para soluções tampão comerciais prontas para uso que requerem concentração precisa, volume constante e esterilização são processos de produção necessários.

Alguns experimentos não requerem esterilização

Tampão Tris, CAPS, MOPS, etc. são sistemas tampão comumente usados em experimentos de Western blot. O ambiente operacional para tais experimentos geralmente não se enquadra no escopo de operações estéreis, e os processos de eletroforese e transferência de membrana em si não requerem um estado estéril. Mesmo que a solução tampão seja esterilizada, o tanque de eletroforese, a placa de transferência, o papel filtro e outros equipamentos usados durante a operação são difíceis de alcançar esterilidade completa, portanto, o significado prático de esterilizar a solução tampão separadamente é limitado. Para tais experimentos, a esterilização da solução tampão não é uma etapa necessária. O que merece mais atenção é a precisão e a frescura da preparação do tampão, em vez do estado estéril.

Lidar com flexibilidade de acordo com o modo de uso

Se a solução tampão precisa ser esterilizada pode ser julgada pelas seguintes perspectivas: se a solução tampão for usada em um curto período de tempo após a preparação e o cenário de uso não envolver cultura de células ou operações assépticas, a esterilização não é necessária; Se a solução tampão precisar ser armazenada por um longo tempo ou reutilizada repetidamente, recomenda-se esterilizá-la para estender sua vida útil; Se o experimento tiver requisitos claros para condições estéreis, como experimentos relacionados à cultura de células, a solução tampão e todos os reagentes de contato precisam ser esterilizados de maneira apropriada; Se a solução tampão for usada para produção de kits de reagentes comerciais, a esterilização e as medidas anticorrosivas fazem parte do controle de qualidade.

Seleção de métodos de esterilização

Para soluções tampão que requerem esterilização, métodos comuns incluem esterilização por vapor de alta pressão e esterilização por filtração. A esterilização por vapor de alta pressão é adequada para soluções tampão resistentes ao calor, mas deve-se notar que altas temperaturas podem afetar o pH de certas soluções tampão. Após a esterilização, o pH precisa ser recalibrado na temperatura experimental. A esterilização por filtração é adequada para soluções tampão que são termicamente instáveis ou facilmente decompostas em altas temperaturas. Microrganismos são removidos através de uma membrana de filtro de 0,22 mícrons, que tem pouco efeito na composição da solução tampão. A escolha do método depende das propriedades químicas e dos requisitos de uso da solução tampão.

Se o tampão biológico precisa ser esterilizado depende do tipo de experimento, método de uso e requisitos de armazenamento. Recomenda-se esterilizar Tris e outras soluções de reserva para estender sua vida útil, enquanto soluções tampão usadas em experimentos bioquímicos rotineiros, como blotting de proteínas, não requerem esterilização. A Desheng pode fornecer vários materiais tampão biológicos, como Tris, Bicina, HEPES, MOPS, etc. para atender às necessidades de tamponamento de diferentes cenários experimentais. Os usuários devem escolher se devem esterilizar a solução tampão preparada com base em suas próprias condições experimentais.