Dans les expériences biologiques, la solution tampon est presque un réactif de base indispensable pour tout plan expérimental.agents de tamponnage biologiquesLa réponse n'est pas une généralisation.Il existe des différences significatives dans la nécessité de la stérilisation pour différents types d'expériences et scénarios d'utilisation..
Objectif et fonction réelle de la stérilisation
Le traitement de stérilisation a pour but principal d'éliminer les micro-organismes et leurs métabolites de la solution,empêcher la contamination du tampon par des bactéries ou des champignons pendant le stockage et l'utilisationPour les solutions de réserve qui nécessitent une conservation à long terme, la stérilisation peut prolonger leur durée de conservation et réduire la dérive du pH ou la dégradation des composants causée par la croissance microbienne.la stérilisation n' est pas applicable à tous les scénarios, et la détermination de la nécessité de la stérilisation doit être fondée sur les exigences de l'expérience elle-même pour les conditions stériles et l'utilisation de solutions tampons.
Traitement de stérilisation recommandé pour la solution de réserve
Le Tris est l'un des agents tamponnants les plus utilisés dans les expériences biologiques.comme les solutions concentrées à 1.5 moles par litre et un pH d'environ 12. si nécessaire, prendre un certain volume de solution de réserve, ajouter une quantité appropriée d'acide chlorhydrique concentré pour l'ajuster au pH cible,et après avoir atteint un certain volumePour ce type de solution de réserve qui nécessite un stockage à long terme, il est recommandé de la stériliser.une contamination microbienne peut être introduiteAu fur et à mesure que le temps de stockage s'allonge, le métabolisme microbien peut modifier le pH de la solution ou produire des substances interférentes.Pour les solutions tampons prêtes à l'emploi qui nécessitent une concentration précise, le volume constant et la stérilisation sont des processus de production nécessaires.
Certaines expériences ne nécessitent pas de stérilisation.
Le tampon Tris, le CAPS, le MOPS, etc. sont des systèmes tampons couramment utilisés dans les expériences Western blot.,même si la solution tampon est stérilisée, le réservoir d'électrophorèse, la plaque de transfert,le papier filtrant et les autres équipements utilisés pendant l'opération sont difficiles à rendre complètement stériles;Pour de telles expériences, la stérilisation de la solution tampon n'est pas une étape nécessaire.Ce qui mérite plus d'attention, c'est la précision et la fraîcheur de la préparation du tampon., plutôt que l'état stérile.
Manipulation flexible selon le mode d'utilisation
La question de savoir si la solution tampon doit être stérilisée peut être jugée à partir des points de vue suivants:si la solution tampon est utilisée dans un court laps de temps après la préparation et que le scénario d'utilisation n'implique pas de culture cellulaire ou d'opérations aseptiques, la stérilisation n'est pas requise; si la solution tampon doit être stockée pendant une longue période ou réutilisée à plusieurs reprises, il est recommandé de la stériliser pour prolonger sa durée de conservation;Si l'expérience présente des exigences claires en matière de stérilité, comme pour les expériences liées à la culture cellulaire, la solution tampon et tous les réactifs de contact doivent être stérilisés de manière appropriée;Si une solution tampon est utilisée pour la production commerciale de kits de réactifs, les mesures de stérilisation et d'anticorrosion font partie du contrôle de la qualité.
Sélection des méthodes de stérilisation
Pour les solutions tampon nécessitant une stérilisation, les méthodes courantes comprennent la stérilisation à la vapeur à haute pression et la stérilisation par filtration.La stérilisation par vapeur à haute pression convient aux solutions tampons résistantes à la chaleurIl convient toutefois de noter que des températures élevées peuvent affecter le pH de certaines solutions tampons.La stérilisation par filtration convient aux solutions tampons qui sont thermiquement instables ou facilement décomposées à haute températureLes microorganismes sont éliminés par une membrane filtrante de 0,22 microns, ce qui a peu d'effet sur la composition de la solution tampon.Le choix de la méthode dépend des propriétés chimiques et des exigences d'utilisation de la solution tampon.
La question de savoir si le tampon biologique doit être stérilisé dépend du type d'expérience, de la méthode d'utilisation et des exigences de stockage.Il est recommandé de stériliser le Tris et les autres solutions de réserve pour prolonger leur durée de conservation., tandis que les solutions tampons utilisées dans les expériences biochimiques de routine telles que le blanchiment des protéines ne nécessitent pas de stérilisation.BicyclesLes utilisateurs doivent choisir de stériliser la solution tampon préparée en fonction de leurs propres conditions expérimentales.
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