Analisi della necessità di sterilizzazione con soluzione tampone biologica

In esperimenti biologici, la soluzione tampone è quasi un reagente di base indispensabile per ogni progetto sperimentale.agenti di tamponamento biologiciLa risposta non è una generalizzazione.Esistono differenze significative nella necessità della sterilizzazione per diversi tipi di esperimenti e scenari di utilizzo..

Scopo e funzione effettiva della sterilizzazione

Lo scopo principale del trattamento di sterilizzazione è quello di rimuovere i microrganismi e i loro metaboliti dalla soluzione.prevenire la contaminazione del tampone da batteri o funghi durante la conservazione e l'usoPer le soluzioni di riserva che richiedono una conservazione a lungo termine, la sterilizzazione può prolungare la loro durata di conservazione e ridurre la deriva del pH o la degradazione dei componenti causata dalla crescita microbica.la sterilizzazione non è applicabile a tutti gli scenari, e la determinazione della necessità della sterilizzazione dovrebbe basarsi sui requisiti dell'esperimento stesso per le condizioni di sterilizzazione e l'uso di soluzioni tampone.

Trattamento di sterilizzazione consigliato per la soluzione di riserva

Il Tris è uno degli agenti tampone più utilizzati negli esperimenti biologici.come soluzioni concentrate con 1.5 moles per litro e un pH di circa 12. Se necessario, prendere un certo volume di soluzione di riserva, aggiungere una quantità adeguata di acido cloridrico concentrato per regolare il pH di riferimento,e dopo aver raggiunto un certo volumePer questo tipo di soluzione di riserva che richiede una conservazione a lungo termine, si raccomanda di sterilizzarla.la contaminazione microbica può essere introdottaCon il prolungamento del tempo di conservazione, il metabolismo microbico può modificare il pH della soluzione o produrre sostanze interferenti.Per soluzioni cuscinetto pronte all'uso commerciali che richiedono una concentrazione precisa, il volume costante e la sterilizzazione sono processi di produzione necessari.

Alcuni esperimenti non richiedono sterilizzazione

Tris buffer, CAPS, MOPS, ecc. sono sistemi di buffer comunemente utilizzati negli esperimenti Western blot.,Anche se la soluzione tampone è sterilizzata, il serbatoio di elettroforesi, la piastra di trasferimento,la carta filtrabile e altre attrezzature utilizzate durante l'operazione sono difficili da ottenere una completa sterilità;Per tali esperimenti, la sterilizzazione della soluzione tampone non è un passaggio necessario.Ciò che merita maggiore attenzione è l'accuratezza e la freschezza della preparazione del tampone, piuttosto che lo stato sterile.

Manipolazione flessibile in base alla modalità di utilizzo

La necessità di sterilizzare la soluzione tampone può essere valutata in base alle seguenti prospettive:se la soluzione tampone viene utilizzata entro un breve periodo di tempo dopo la preparazione e lo scenario di utilizzo non prevede coltura cellulare o operazioni asetticheSe la soluzione tampone deve essere conservata a lungo o riutilizzata ripetutamente, si raccomanda di sterilizzarla per prolungare la durata di conservazione;Se l'esperimento ha requisiti chiari per le condizioni di sterilizzazione, come per gli esperimenti relativi alla coltura cellulare, la soluzione tampone e tutti i reagenti di contatto devono essere sterilizzati in modo appropriato;Se la soluzione tampone è utilizzata per la produzione di kit di reagenti commerciali, la sterilizzazione e le misure anticorrosione fanno parte del controllo della qualità.

Selezione dei metodi di sterilizzazione

Per le soluzioni tampone che richiedono la sterilizzazione, i metodi comuni includono la sterilizzazione ad alta pressione a vapore e la sterilizzazione a filtraggio.La sterilizzazione ad alta pressione a vapore è adatta per soluzioni tampone resistenti al caloreDopo la sterilizzazione, il pH deve essere ricalibrato alla temperatura sperimentale.La sterilizzazione a filtrazione è adatta per soluzioni tampone che sono termicamente instabili o facilmente decomposti ad alte temperatureI microrganismi vengono eliminati attraverso una membrana filtrante di 0,22 micron, che ha un effetto limitato sulla composizione della soluzione tampone.La scelta del metodo dipende dalle proprietà chimiche e dalle esigenze di utilizzo della soluzione tampone..

Se il tampone biologico debba essere sterilizzato dipende dal tipo di esperimento, dal metodo di utilizzo e dalle esigenze di conservazione.Si raccomanda di sterilizzare il Tris e altre soluzioni di riserva per prolungare la durata di conservazione., mentre le soluzioni tampone utilizzate in esperimenti biochimici di routine come il blotting proteico non richiedono sterilizzazione.BicineGli utilizzatori devono scegliere se sterilizzare la soluzione tampone preparata in base alle proprie condizioni sperimentali.