En los experimentos biológicos, la solución tampón es un reactivo básico casi indispensable para cada plan experimental. ¿Los Tris, HEPES, MOPS y otros agentes tamponadores biológicos necesitan ser esterilizados después de prepararlos en solución? La respuesta no es una generalización. Existen diferencias significativas en la necesidad de esterilización para diferentes tipos de experimentos y escenarios de uso.
Propósito y función real de la esterilización
El propósito principal del tratamiento de esterilización es eliminar microorganismos y sus metabolitos de la solución, evitando que el tampón se contamine con bacterias u hongos durante el almacenamiento y uso. Para las soluciones de reserva que requieren conservación a largo plazo, la esterilización puede extender su vida útil y reducir la deriva del pH o la degradación de componentes causada por el crecimiento microbiano. Sin embargo, la esterilización no es aplicable a todos los escenarios, y determinar si la esterilización es necesaria debe basarse en los requisitos del propio experimento para condiciones estériles y el uso de soluciones tampón.
Tratamiento de esterilización sugerido para solución de reserva
El Tris es uno de los agentes tamponadores más utilizados en experimentos biológicos. Los laboratorios a menudo preparan grandes volúmenes y altas concentraciones de soluciones madre de Tris, como soluciones concentradas con 1,5 moles por litro y un pH de aproximadamente 12. Cuando sea necesario, se toma un cierto volumen de la solución de reserva, se agrega una cantidad apropiada de ácido clorhídrico concentrado para ajustar al pH objetivo y, después de alcanzar un cierto volumen, se puede usar. Para este tipo de solución de reserva que requiere almacenamiento a largo plazo, se recomienda esterilizarla. Durante el uso repetido de la solución de reserva, si no se esteriliza, se puede introducir contaminación microbiana. A medida que el tiempo de almacenamiento se prolonga, el metabolismo microbiano puede alterar el pH de la solución o producir sustancias interferentes. Para las soluciones tampón comerciales listas para usar que requieren una concentración precisa, el volumen constante y la esterilización son procesos de producción necesarios.
Algunos experimentos no requieren esterilización
El tampón Tris, CAPS, MOPS, etc. son sistemas tampón comúnmente utilizados en experimentos de Western blot. El entorno operativo para tales experimentos generalmente no cae dentro del alcance de las operaciones estériles, y los procesos de electroforesis y transferencia de membrana en sí mismos no requieren un estado estéril. Incluso si la solución tampón se esteriliza, el tanque de electroforesis, la placa de transferencia, el papel de filtro y otros equipos utilizados durante la operación son difíciles de lograr una esterilidad completa, por lo que el significado práctico de esterilizar la solución tampón por separado es limitado. Para tales experimentos, la esterilización de la solución tampón no es un paso necesario. Lo que merece más atención es la precisión y frescura de la preparación del tampón, en lugar del estado estéril.
Manejar de forma flexible según el modo de uso
Si la solución tampón necesita ser esterilizada se puede juzgar desde las siguientes perspectivas: si la solución tampón se agota en un corto período de tiempo después de la preparación y el escenario de uso no implica cultivo celular u operaciones asépticas, no se requiere esterilización; Si la solución tampón necesita almacenarse durante mucho tiempo o reutilizarse repetidamente, se recomienda esterilizarla para extender su vida útil; Si el experimento tiene requisitos claros para condiciones estériles, como experimentos relacionados con el cultivo celular, la solución tampón y todos los reactivos de contacto deben esterilizarse de manera apropiada; Si la solución tampón se utiliza para la producción de kits de reactivos comerciales, la esterilización y las medidas anticorrosión son parte del control de calidad.
Selección de métodos de esterilización
Para las soluciones tampón que requieren esterilización, los métodos comunes incluyen la esterilización por vapor a alta presión y la esterilización por filtración. La esterilización por vapor a alta presión es adecuada para soluciones tampón resistentes al calor, pero se debe tener en cuenta que las altas temperaturas pueden afectar el pH de ciertas soluciones tampón. Después de la esterilización, el pH debe recalibrarse a la temperatura experimental. La esterilización por filtración es adecuada para soluciones tampón que son térmicamente inestables o se descomponen fácilmente a altas temperaturas. Los microorganismos se eliminan a través de una membrana de filtro de 0,22 micras, lo que tiene poco efecto en la composición de la solución tampón. La elección del método depende de las propiedades químicas y los requisitos de uso de la solución tampón.
Si el tampón biológico necesita ser esterilizado depende del tipo de experimento, el método de uso y los requisitos de almacenamiento. Se recomienda esterilizar Tris y otras soluciones de reserva para extender su vida útil, mientras que las soluciones tampón utilizadas en experimentos bioquímicos de rutina como el blotting de proteínas no requieren esterilización. Desheng puede proporcionar varios materiales de tampón biológico como Tris, Bicina, HEPES, MOPS, etc. para satisfacer las necesidades de tamponamiento de diferentes escenarios experimentales. Los usuarios deben elegir si esterilizar la solución tampón preparada en función de sus propias condiciones experimentales.
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