Nell'analisi clinica del sangue, la scelta degli anticoagulanti è un fattore chiave che influenza direttamente l'accuratezza dei risultati.Diversi anticoagulanti hanno meccanismi di azione e ambito di applicazione diversi., e una selezione errata può portare alla degradazione degli acidi nucleici, a pseudolungamento del tempo di coagulazione o a deviazione di misura del volume dei globuli.Comprendere le caratteristiche e i limiti dei vari anticoagulanti può aiutare a fare giudizi più ragionevoli durante la fase di progettazione degli esami.
Perché l'estrazione dell'acido nucleico nel sangue intero evita l'eparina?
Heparina litioL' eparina e l' eparina di sodio sono anticoagulanti comunemente utilizzati, ma presentano notevoli limitazioni nella raccolta del sangue per l' estrazione di acidi nucleici.L' eparina si lega alle proteine della membrana sulla superficie della membrana cellulareL' eparina può anche legarsi e attivare vari proteasomi e sistemi di complemento nel sangue intero.producendo una serie di effetti enzimatici che possono facilmente portare alla degradazione degli acidi nucleici e ridurre il tasso di acquisizione degli acidi nucleiciL'effetto dell'estrazione di acidi nucleici da campioni di sangue intero anticoagulati con eparina conservati a temperatura ambiente è spesso insoddisfacente.
L' interferenza dell' eparina non è limitata solo allo stadio di estrazione, ma influenza anche il successivo rilevamento con PCR.L' eparina può influenzare l' attività della DNA polimerasi o interferire con la precisione della concentrazione di ioni di magnesio nel sistema di reazione., con conseguente diminuzione dell'efficienza di amplificazione o comparsa di bande non specifiche.L' eparina non è una scelta ideale in scenari che coinvolgono l' estrazione di acidi nucleici e il test di amplificazione.
Selezione della concentrazione di citrato di sodio nel test di coagulazione
Il citrato di sodio è l'anticoagulante standard nel test della funzione di coagulazione. Sono disponibili sul mercato due concentrazioni di soluzioni di citrato di sodio, 3,2% e 3,8%.Anche se inizialmente si credeva che entrambi potessero essere utilizzati, la verifica pratica ha dimostrato che la concentrazione del 3,8% di anticoagulante comporta maggiori rischi. 3.8% gli anticoagulanti hanno maggiori probabilità di causare un falso prolungamento nei test di coagulazione dipendenti dal calcio come PT e APTT, soprattutto nei casi in cui la dimensione del campione è insufficiente o il rapporto dei globuli rossi è elevato, con conseguente relativa diminuzione del volume plasmatico.Se il rapporto tra gli anticoagulanti e il sangue supera il rapporto raccomandato di:9, concentrazioni più elevate di anticoagulanti esacerberanno ulteriormente questa deviazione.
Nella stragrande maggioranza degli scenari clinici, una concentrazione di 3,2% di citrato di sodio è una scelta più affidabile.L'8% presenta alcuni vantaggiTuttavia, questa rara situazione può essere risolta adeguando la percentuale di anticoagulanti e non è necessario modificare la concentrazione comunemente utilizzata per scenari a bassa probabilità.dopo test clinici, la concentrazione del citrato di sodio al 3,2% ha acquisito un più ampio riconoscimento.
Effetto del sale di EDTA sul volume delle cellule sanguigne
Tutti i sali di EDTA possono causare il restringimento delle cellule del sangue, influenzando così il traccia ematocrito dopo la centrifugazione.La differenza tra i diversi sali di EDTA si riflette nella loro solubilità, con potassio EDTA che ha una maggiore solubilità rispetto all' EDTA di sodio, rendendo l' EDTA di potassio più comunemente usato.
I valori di pH del sale disodico ed del sale dipotassico EDTA sono relativamente inferiori a quelli del sale tripotassico EDTA.e questo effetto gonfiore può parzialmente compensare il restringimento delle cellule causato dalla pressione osmotica. per la taratura dei contatori elettronici dei globuli,l' uso di sale disodico EDTA e di sale dipotassico EDTA come anticoagulanti produce valori di ematocrito più vicini ai valori reali rispetto all' uso di sale tripotassico EDTAQuesta differenza vale la pena di notare in scenari in cui è necessaria una misurazione precisa del volume medio dei globuli.
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