Nos exames clínicos de sangue, a seleção de anticoagulantes é um fator chave que afeta diretamente a precisão dos resultados do teste. Diferentes anticoagulantes têm diferentes mecanismos de ação e escopo de aplicação, e a seleção incorreta pode levar à degradação do ácido nucleico, ao pseudoprolongamento do tempo de coagulação ou ao desvio da medição do volume das células sanguíneas. Compreender as características e limitações de vários anticoagulantes pode ajudar a tomar decisões mais razoáveis durante a fase de concepção dos testes.
Por que a extração de ácido nucleico do sangue total evita a heparina
Heparina lítioe heparina sódica são anticoagulantes comumente usados, mas apresentam limitações significativas na coleta de sangue para fins de extração de ácido nucleico. A heparina liga-se às proteínas da membrana na superfície da membrana celular, causando alterações na permeabilidade da membrana que podem afetar a eficiência subsequente da liberação de ácido nucleico. A heparina também pode ligar e ativar vários proteassomas e sistemas complemento no sangue total, produzindo uma série de efeitos enzimáticos que podem facilmente levar à degradação do ácido nucleico e reduzir a taxa de aquisição de ácidos nucleicos. O efeito da extração de ácidos nucleicos de amostras de sangue total anticoaguladas com heparina armazenadas à temperatura ambiente é frequentemente insatisfatório.
A interferência da heparina não se limita apenas à etapa de extração, mas também afeta a detecção subsequente da PCR. A heparina pode afetar a atividade da DNA polimerase ou interferir na precisão da concentração de íons magnésio no sistema de reação, levando a uma diminuição na eficiência da amplificação ou ao aparecimento de bandas inespecíficas. Portanto, a heparina não é a escolha ideal em cenários que envolvem extração de ácidos nucleicos e testes de amplificação.
Seleção da concentração de citrato de sódio em testes de coagulação
O citrato de sódio é o anticoagulante padrão nos testes de função de coagulação. Existem duas concentrações de soluções de citrato de sódio, 3,2% e 3,8%, disponíveis no mercado. Embora inicialmente se acreditasse que ambos poderiam ser utilizados, a verificação prática mostrou que a concentração de 3,8% de anticoagulante apresenta mais riscos. 3,8% dos anticoagulantes têm maior probabilidade de causar falso prolongamento em testes de coagulação dependentes de cálcio, como PT e APTT, especialmente nos casos em que o tamanho da amostra é insuficiente ou a proporção de glóbulos vermelhos é elevada, resultando numa diminuição relativa do volume plasmático. Se a proporção de anticoagulantes em relação ao sangue exceder a proporção recomendada de 1:9, concentrações mais elevadas de anticoagulantes agravarão ainda mais este desvio.
Na grande maioria dos cenários clínicos, uma concentração de 3,2% de citrato de sódio é uma escolha mais confiável. Apenas em amostras de sangue especiais com muito poucos glóbulos vermelhos, uma concentração de 3,8% apresenta certas vantagens. Mas esta situação rara pode ser resolvida ajustando a proporção de anticoagulantes, não havendo necessidade de alterar a concentração habitualmente utilizada para cenários de pequena probabilidade. Portanto, após testes na prática clínica, a concentração de 3,2% de citrato de sódio ganhou maior reconhecimento.
O efeito do sal EDTA no volume das células sanguíneas
Os sais de EDTA apresentam excelentes efeitos anticoagulantes, mas apresentam interferência. Todos os sais de EDTA podem causar o encolhimento das células sanguíneas, afetando assim o traço do hematócrito após a centrifugação. A diferença entre os diferentes sais de EDTA reflete-se na sua solubilidade, com o EDTA de potássio tendo uma solubilidade mais elevada do que o EDTA de sódio, tornando o EDTA de potássio mais comumente utilizado.
Os valores de pH do sal dissódico de EDTA e do sal dipotássico de EDTA são relativamente inferiores aos do sal tripotássico de EDTA. Neste ambiente ácido, as células incham e este efeito de inchaço pode compensar parcialmente o encolhimento celular causado pela pressão osmótica. Para a calibração de contadores eletrônicos de células sanguíneas, o uso do sal dissódico de EDTA e do sal dipotássico de EDTA como anticoagulantes produz valores de hematócrito mais próximos dos valores reais do que o uso do sal tripotássico de EDTA. Esta diferença é digna de nota em cenários onde é necessária uma medição precisa do volume médio de células sanguíneas.
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