En los análisis de sangre clínicos, la selección de anticoagulantes es un factor clave que afecta directamente la precisión de los resultados de la prueba. Los diferentes anticoagulantes tienen diferentes mecanismos de acción y ámbito de aplicación, y una selección incorrecta puede provocar degradación del ácido nucleico, pseudoprolongación del tiempo de coagulación o desviación en la medición del volumen de células sanguíneas. Comprender las características y limitaciones de diversos anticoagulantes puede ayudar a emitir juicios más razonables durante la fase de diseño de las pruebas.
¿Por qué la extracción de ácido nucleico en sangre total evita la heparina?
heparina litioy la heparina sódica son anticoagulantes de uso común, pero tienen limitaciones significativas en la recolección de sangre para fines de extracción de ácidos nucleicos. La heparina se une a las proteínas de la superficie de la membrana celular, provocando cambios en la permeabilidad de la membrana que pueden afectar la eficacia posterior de la liberación de ácidos nucleicos. La heparina también puede unirse y activar varios proteosomas y sistemas del complemento en la sangre total, produciendo una serie de efectos enzimáticos que pueden conducir fácilmente a la degradación de los ácidos nucleicos y reducir la tasa de adquisición de ácidos nucleicos. El efecto de extraer ácidos nucleicos de muestras de sangre entera anticoagulada con heparina almacenadas a temperatura ambiente suele ser insatisfactorio.
La interferencia de la heparina no sólo se limita a la etapa de extracción, sino que también afecta a la detección posterior por PCR. La heparina puede afectar la actividad de la ADN polimerasa o interferir con la precisión de la concentración de iones magnesio en el sistema de reacción, lo que provoca una disminución en la eficiencia de amplificación o la aparición de bandas no específicas. Por lo tanto, la heparina no es una opción ideal en escenarios que involucran pruebas de extracción y amplificación de ácidos nucleicos.
Selección de la concentración de citrato de sodio en pruebas de coagulación
El citrato de sodio es el anticoagulante estándar en las pruebas de función de la coagulación. Hay dos concentraciones de soluciones de citrato de sodio, 3,2% y 3,8%, disponibles en el mercado. Aunque inicialmente se creía que ambos podrían usarse, la verificación práctica ha demostrado que la concentración de anticoagulante al 3,8% presenta más riesgos. Los anticoagulantes al 3,8% tienen más probabilidades de causar una falsa prolongación en las pruebas de coagulación dependientes del calcio, como PT y APTT, especialmente en los casos en que el tamaño de la muestra es insuficiente o la proporción de glóbulos rojos es alta, lo que resulta en una disminución relativa del volumen plasmático. Si la proporción de anticoagulantes en sangre excede la proporción recomendada de 1:9, concentraciones más altas de anticoagulantes exacerbarán aún más esta desviación.
En la gran mayoría de escenarios clínicos, una concentración de citrato de sodio al 3,2% es una opción más confiable. Sólo en muestras de sangre especiales con muy pocos glóbulos rojos, una concentración del 3,8% muestra ciertas ventajas. Pero esta rara situación se puede resolver ajustando la proporción de anticoagulantes y no es necesario cambiar la concentración comúnmente utilizada para escenarios de pequeña probabilidad. Por lo tanto, después de las pruebas de la práctica clínica, la concentración de citrato de sodio al 3,2% ha ganado un reconocimiento más amplio.
El efecto de la sal EDTA sobre el volumen de células sanguíneas.
Las sales de EDTA presentan excelentes efectos anticoagulantes, pero no están exentas de interferencias. Todas las sales de EDTA pueden provocar la contracción de las células sanguíneas, lo que afecta el hematocrito traza después de la centrifugación. La diferencia entre las diferentes sales de EDTA se refleja en su solubilidad: el EDTA potásico tiene una mayor solubilidad que el EDTA sódico, lo que hace que el EDTA potásico se utilice con mayor frecuencia.
Los valores de pH de la sal disódica de EDTA y de la sal dipotásica de EDTA son relativamente más bajos que los de la sal tripotásica de EDTA. En este ambiente ácido, las células se hincharán y este efecto de hinchazón puede compensar parcialmente la contracción celular causada por la presión osmótica. Para la calibración de contadores electrónicos de células sanguíneas, el uso de sal disódica de EDTA y sal dipotásica de EDTA como anticoagulantes produce valores de hematocrito que están más cerca de los valores reales que el uso de sal tripotásica de EDTA. Vale la pena señalar esta diferencia en escenarios donde se requiere una medición precisa del volumen promedio de células sanguíneas.
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